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【背景和目的】:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL）是肿瘤坏死因子（TNF）基因超家族的成员之一,它能通过死亡受体（death receptor,DR）途径引起细胞凋亡。之前有报道,TRAIL能够选择性地引起多种肿瘤细胞发生凋亡,但对多数正常细胞没有明显毒性作用,这提示TRAIL在肿瘤治疗中具有潜在的应用价值。目前,重组型TRAIL蛋白和TRAIL受体单抗正在进行临床试验中,它们具有良好的抗肿瘤效果和温和的毒副作用,这一结果令人振奋。然而,很多肿瘤细胞对TRAIL具有耐受性,这就需要我们联合其它治疗方法增强肿瘤细胞对TRAIL的敏感性。我们之前报道Bcl-XL siRNA能够增强TRAIL诱导的细胞凋亡作用。但是在体内传递化学合成的siRNA仍然是RNA干扰治疗手段发展的重要障碍。为此我们构建了在U6启动子驱动下能够表达Bcl-XL靶向的小发夹RNA（Bcl-XL shRNA）的腺病毒Ad/Bcl-XL shRNA。在本项研究中我们的主要目标是检测联合用药时,Ad/Bcl-XL shRNA能否增强Ad/gTRAIL在结肠癌细胞包括TRAIL耐药细胞中诱导的凋亡。【材料和方法】:用293细胞扩增实验中的各种重组腺病毒（Ad/CMV-GFP,Ad/gTRAIL,Ad/Bcl-XL shRNA）,通过氯化铯密度梯度离心法纯化腺病毒,OD260和TCID50的方法分别测定病毒液浓度和滴度;用Ad/gTRAIL反复处理DLD1细胞筛选得到TRAIL耐受的DLD1-R细胞;用MTT方法测定细胞相对活性;用Westernblot的方法测定凋亡相关蛋白的表达情况;实验中PBS组作为空白对照,Ad/CMV-GFP作为载体对照:用方差分析的方法比较各组的差异。【结果】:联合使用Ad/gTRAIL和Ad/Bcl-XL shRNA能明显抑制TRAIL敏感的结肠癌细胞系DLD1和Lovo的生长,与单药相比联合用药显著增强肿瘤细胞凋亡,具有协同作用;用Ad/gTRAIL反复处理DLD1会导致获得性TRAIL耐药,得到TRAIL耐药的DLD1-R细胞,在该细胞中Bcl-XL表达明显增高;进一步研究提示联合Ad/gTRAIL和Ad/Bcl-XL shRNA可以逆转DLD1-R的TRAIL获得性耐药,增强TRAIL对caspase-8、caspase-9、caspase-3、PARP及BID的激活作用;联合治疗还明显增强了细胞色素c的释放。【结论】:体外实验证明联合使用Ad/gTRAIL和Ad/Bcl-XL shRNA能显著增强对TRAIL敏感和TRAIL耐受结肠癌细胞的杀伤作用,可以进一步在动物模型上验证这一联合治疗策略的抗肿瘤效果。