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目的:糖尿病与乳腺癌的发生有着复杂的关系。患糖尿病女性伴乳腺癌的风险远高于没有糖尿病的女性[1]。二甲双胍作为临床治疗2型糖尿病的常用降糖药,已经被广泛使用了40多年。大量的研究证实服用二甲双胍可以降低糖尿病患者的癌症发病率和死亡率。尤其在乳腺癌中,二甲双胍能显著降低乳腺癌的发病风险,延长乳腺癌患者的生存时间,但机制并不清楚。该实验中,我们拟检测二甲双胍对乳腺癌增殖、凋亡、上皮-间质转化等影响,并探讨其机制是否与YAP/TAZ蛋白相关。方法:（1）收集2016年1月至2018年1月在重庆医科大学第二附属医院接受手术切除的80例乳腺癌患者的资料和组织样本,其中三阴性乳腺癌40例,HER-2+乳腺癌40例以及正常癌旁组织40例。利用免疫组织化学检测YAP/TAZ在两种癌组织和癌旁组织中表达的差异性。探讨YAP和TAZ在两种乳腺癌中的表达与临床病理参数之间的关系。（2）不同浓度的二甲双胍（0-120μmol/L）处理TNBC细胞株（MDA-MB-231,4T1）和HER2阳性细胞系（SKBR3）。分别于24、48、72h进行CCK8实验,以检查细胞活力。同时观测不同浓度的二甲双胍处理下,细胞集落形成试验,以检查二甲双胍治疗的抑制作用。（3）流式细胞术检测二甲双胍对细胞凋亡的影响;细胞划痕实验检测二甲双胍对乳腺癌细胞迁移能力的影响;PCR检测二甲双胍处理后乳腺癌细胞中EMT相关标志物的m RNA水平改变。（4）PCR和蛋白印迹实验检测细胞中YAP和TAZ两个主要基因以及下游EGFR、CTGF和CYR61表达的改变。免疫荧光检测评估YAP和TAZ在二甲双胍处理后细胞中的亚细胞定位改变;构建MDA-MB-231细胞的高表达ZQ0000123-YAP细胞系,探究YAP过表达能否恢复二甲双胍的影响。（5）将4T1细胞接种于雄性BALB/c小鼠（5-6周龄）右背肩胛骨中,成瘤后随机分组,通过腹腔注射二甲双胍干预实验组小鼠移植瘤的生长,实验周期测小鼠瘤子大小以及小鼠体重;用免疫组化检测二甲双胍对小鼠移植瘤的YAP和TAZ的表达水平的影响。结果:（1）YAP在三阴性乳腺癌中阳性率为75.0%（30/40）,HER-2阳性乳腺癌中阳性率为67.5%（27/40）,癌旁正常乳腺组织中YAP阳性率为30.0%（12/40）。TAZ在三阴性乳腺癌样本中阳性率为70.0%（28/40）,在HER-2阳性乳腺癌样本中阳性率为60.0%（24/40）,癌旁正常乳腺组织中阳性率为35.0%（14/40）。YAP和TAZ在三阴性乳腺癌样本中阳性率显著高于癌旁正常乳腺组织（P＜0.05）。YAP和TAZ在HER-2阳性乳腺癌样本中阳性率同样显著高于癌旁正常乳腺组织（P＜0.05）。在三阴性乳腺癌中,YAP和TAZ的阳性表达均与肿瘤大小有关,差异具有统计学意义（P＜0.05）,YAP和TAZ均与发病年龄、组织学分级、ki67表达无关,差异无统计学意义（P＞0.05）。而在HER-2阳性乳腺癌中,YAP阳性表达与肿瘤大小、组织学分级、ki67表达均有关,差异具有统计学意义（P＜0.05）,TAZ阳性表达则与肿瘤大小、发病年龄、组织学分级、ki67表达均无关,差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）二甲双胍以剂量和时间依赖的方式抑制TNBC细胞及SKBR3细胞的生长,IC50值分别为67.2μmol/L（72h）、15.2μmol/L（72h）和96.25μmol/L（72h）。我们进一步进行了集落形成试验,以检查二甲双胍治疗的抑制作用,我们的结果表明二甲双胍可以显著减少细胞中的集落数量。（3）二甲双胍处理后的细胞凋亡比例显著增加,G1期细胞比例显著增加,而G2/M期细胞比例降低;而划痕实验结果表明,二甲双胍能以剂量依赖性方式抑制细胞迁移;同时二甲双胍的处理可显著降低细胞中间充质蛋白如纤连蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白的转录活性,同时E-钙粘蛋白转录活性增加。（4）PCR和蛋白印迹实验检测结果显示:经二甲双胍处理后YAP、TAZ两个基因的表达被显著降低,其下游EGFR、CTGF和CYR61三个基因的表达也显著下降。二甲双胍能以剂量依赖的方式抑制YAP/TAZ蛋白水平的表达。免疫荧光评估YAP和TAZ在二甲双胍处理后细胞中的亚细胞定位,结果表明二甲双胍减弱了YAP和TAZ的核易位。（5）成功构建MDA-MB-231细胞的高表达ZQ0000123-YAP细胞系,高表达YAP的MDAMB-231细胞比空白对照组具有更高的细胞活力,二甲双胍处理后细胞生长受到抑制,但YAP的过表达能够反转二甲双胍对细胞的影响。经二甲双胍治疗后,EMT能够得到恢复,表现为间充质蛋白（如波形蛋白和N-钙粘蛋白）表达升高。同时,E-cadherin的表达降低。（6）对TNBC细胞体内抑制作用的研究中,二甲双胍治疗没有引起小鼠体重明显下降。与对照组相比,二甲双胍显著降低了移植瘤小鼠的最终肿瘤体积和肿瘤重量。此外,二甲双胍处理降低了移植瘤组织中YAP/TAZ的表达。我们的结果表明二甲双胍可能是通过抑制YAP/TAZ致瘤活性从而抑制TNBC肿瘤的生长。结论:在这项研究中,我们证明二甲双胍治疗能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、上皮-间质转化,促进其凋亡并阻断细胞处于G1期,从而抑制其生长。在探讨有无YAP/TAZ轴参与其中时,经二甲双胍处理后YAP、TAZ两个基因及蛋白的表达被显著降低,同时改变的还有减弱了YAP、TAZ的核易位。此外,YAP的过表达能够反转二甲双胍对细胞的影响。最后二甲双胍还可抑制乳腺癌细胞小鼠的肿瘤生长。总之,我们的结果支持二甲双胍通过YAP/TAZ轴促使乳腺癌细胞发生生物学改变。