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生物质谱技术用于蛋白质组学研究时,从复杂生物样品中高效分离富集低丰度蛋白质和多肽的样品前处理技术是关键。多孔聚合物微球是一种性能丰富和应用广泛的分离材料。本论文的研究工作主要集中于多孔亲和色谱微球的制备及其在复杂生物样品中高选择性和高灵敏度富集多肽的应用研究。 针对复杂生物样品中糖基化蛋白质和糖肽丰度低的问题,发展了三种多孔亲和色谱材料用于选择性富集糖肽。(1)以半胱氨酸基多孔硅球为基质,在半胱氨酸链末端修饰麦芽糖,制备含双层分子结构的亲水色谱材料,实现糖肽的富集检测限低至8fmol。在鼠肝蛋白质组学研究时,从100μg样品富集鉴定出466个糖基化蛋白质的906个N-糖基化位点,糖肽的富集特异性为56.9%;(2)利用多层自组装技术在大孔吸附树脂表面修饰多层多聚糖制备得到亲水色谱材料,用于糖肽富集时检测限低至5fmol,从100μg鼠肝蛋白提取液样品富集鉴定出379个糖蛋白的745个N-糖基化位点。整个富集过程耗时10min,富集速度高于目前已有的硅胶基质糖肽富集材料和磁性纳米材料基质富集材料;(3)利用原位聚合法将纳米金颗粒固定在大孔吸附树脂表面,利用金-巯基相互作用制备半胱氨酸修饰纳米金增强大孔吸附树脂微球,用于糖肽富集时检测限低至2.5fmol。在100μg鼠肝蛋白提取液样品富集鉴定出476个糖蛋白的883个N-糖基化位点。 针对复杂生物样品中磷酸化蛋白质和磷酸肽丰度低和动态变化范围宽等问题,发展了两种大孔吸附树脂复合微球用于磷酸肽的富集研究。在氨基大孔吸附树脂微球表面修饰磷酸酯钛,制备的新型Ti4+-IMAC用于磷酸肽富集时表现出高富集特异性(β-酪蛋白酶解液和牛血清白蛋白酶解液摩尔比为1∶500)和高检测灵敏度(5fmol)。分别用于脱脂牛奶和人血清蛋白酶解液中磷酸肽的富集研究,证实其优异的富集选择性和富集效率。(2)将胍基修饰于大孔吸附树脂内孔表面制备得到亲和色谱材料MAR-Gua,其对多磷酸肽富集显示高富集特异性(β-酪蛋白酶解液和牛血清白蛋白酶解液摩尔比为1∶500)和高检测灵敏度(2fmol)。用于脱脂牛奶酶解样品分析时,富集鉴定出8条多磷酸肽,富集效果明显优于商品化TiO2富集材料,对复杂生物样品中的磷酸肽呈现良好的富集效果。