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第一部分:葡萄籽原花青素治疗大鼠溃疡性结肠炎作用机理的初步研究目的:观察葡萄籽原花青素(GSPE)对三硝基苯磺酸(TNBS)/25%乙醇溶液诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用,并初步探讨其作用机理。方法:用TNBS/25%乙醇采用二次致炎的方法复制大鼠UC模型,将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、柳氮磺吡啶(SASP)组和GSPE低、中、高剂量组(100mg/kg、200mg/kg、400 mg/kg),灌胃给药7天后处死大鼠,取结肠标本评价炎症程度及指标检测,结肠炎症的评价包括大体形态损伤、组织学变化、组织与血清中髓过氧化物酶(MPO)活力,生化法检测结肠组织中丙二醛(MDA)含量,双抗体夹心ELISA法检测结肠组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)及白细胞介素4(IL-4)的表达。结果:①给药一周后,与正常对照组比较,模型对照组大鼠体重明显下降,结肠湿重指数明显增加;与模型对照组比较,GSPE各剂量组大鼠体重下降程度较轻(P＜0.05),结肠湿重指数明显降低(P＜0.05)。②大体观察显示,模型对照组大鼠结肠粘膜出现大面积溃疡、坏死,GSPE各剂量组大鼠结肠粘膜溃疡面积缩小,损伤评分下降;组织学检查结果显示,与模型对照组比较,GSPE各治疗组大鼠结肠组织损伤明显减轻(P＜0.05)。③与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清与结肠组织中的MPO活性均明显升高(P＜0.05);与模型对照组比较,GSPE各剂量组大鼠血清中MPO活性与GSPE中、高剂量组结肠组织中MPO活性均明显降低(P＜0.05);④与正常对照组比较,模型对照组大鼠结肠组织中的MDA含量均明显升高(P＜0.05);与模型对照组比较,GSPE各剂量组大鼠结肠组织中MDA含量均明显降低(P＜0.01)。⑤与正常对照组比较,模型对照组大鼠结肠组织中的致炎细胞因子IL-1β水平明显升高(P＜0.05);与模型对照组比较,GSPE各剂量组中IL-1β水平均明显降低(P＜0.01);GSPE高剂量时能升高UC大鼠组织中的抗炎细胞因子IL-2、IL-4水平(P＜0.05);血清中IL-1β、IL-4、IL-2含量低于各细胞因子最低检测线,不能用于评价药物的作用。结论:GSPE对溃疡性结肠炎大鼠的急性阶段有明显的治疗作用,其作用机制可能与减轻组织损伤、抑制炎细胞浸润、减轻脂质过氧化损伤、抑制促炎细胞因子IL-1β生成有关,高剂量时也可能与促进抗炎细胞因子IL-2和IL-4的生成有关。第二部分:葡萄籽原花青素对大鼠溃疡性结肠炎结肠组织中NF-KB、PKC信号转导系统的调节作用目的:通过观察葡萄籽原花青素(GSPE)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织中NF-kB、PKC信号转导系统的调节作用,以深入探讨其治疗作用机理。方法:直肠给予雄性Wistar大鼠TNBS/50%乙醇溶液以复制大鼠UC模型,分别应用GSPE低、中、高剂量(100、200、400mg/kg)对其进行治疗,并以柳氮磺吡啶(SASP)作为阳性对照,于灌胃给药7d后处死大鼠,取结肠标本评价炎症程度及指标检测,包括大体形态损伤、组织学变化,生化法检测组织与血清中髓过氧化物酶(MPO)活力、结肠组织中丙二醛(MDA)含量,双抗体夹心ELISA法检测结肠组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-kB(NF-kB)、核因子-kB抑制蛋白(IkBa)、磷酸化IkBa(pIkBa)、IkB激酶(IkK)、蛋白激酶C(PKC)及蛋白激酶Ca(PKCa)的表达。结果:①与正常对照组比较,模型对照组大鼠结肠湿重指数、大体和组织学损伤评分、血清与结肠组织中MPO活力、结肠组织中MDA含量均明显升高(P＜0.05);与模型对照组比较,GSPE各剂量组结肠湿重指数、大体和组织学损伤评分、血清与结肠组织中MPO活力、结肠组织中MDA含量均明显降低(P＜0.05)。②与正常对照组比较,模型对照组大鼠结肠组织中的致炎细胞因子IL-1β水平明显升高(P＜0.05);与模型对照组比较,GSPE中、高剂量能明显降低大鼠结肠组织中IL-1β水平(P＜0.01)。③与正常对照组比较,模型对照组大鼠结肠组织中pIkBa、IkK、NF-kB与IkBa的表达均明显升高;与模型对照组比较,GSPE各剂量组大鼠结肠组织中pIkBa与IkK表达均明显降低(P＜0.05),GSPE低、中剂量组大鼠结肠组织中NF-kB表达也明显降低(P＜0.05),GSPE各剂量组大鼠结肠组织中IkBa的表达无显著性差异(P＞0.05)。④与正常对照组比较,模型对照组大鼠结肠组织中PKC、PKCa活性与PKC含量均明显降低;与模型对照组比较,GSPE低、中剂量组大鼠结肠组织中PKC活性明显升高(P＜0.05),GSPE各剂量组大鼠结肠组织中PKCa活性也明显升高(P＜0.05),而GSPE各剂量组大鼠结肠组织中PKC含量变化均无明显差异(P＞0.05)。结论:研究结果表明葡萄籽原花青素对溃疡性结肠炎大鼠的作用机制为:①GSPE能抑制IkK的活化,阻断IkBa的磷酸化及降解,使NF-kB失活,从而使NF-kB表达减少,抑制了致炎因子的生成,阻断了炎症过程。②GSPE可能激活了PKC或PKCa,促进细胞蛋白质合成,DNA合成以及细胞的生长分化,以促进大鼠UC组织损伤的修复。