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MSMEG_2731是耻垢分枝杆菌中一个功能未知的蛋白,其同源蛋白在分枝杆菌家族中非常保守。MSMEG_2731由三个功能未知的结构域DUF349串联构成,被归类于CLSK872100蛋白簇,这类蛋白的特征是丙氨酸和精氨酸含量丰富。MSMEG_2731及其同源蛋白除了在分枝杆菌种属中存在,在链霉菌等一部分高GC含量的革兰氏阳性菌中也有发现。本研究克隆并纯化出MSMEG_2731重组蛋白,证明它以单体的形式存在,利用免疫荧光技术和定量Western blotting技术证实了MSMEG_2731在耻垢分枝杆菌中稳定表达,属于低丰度表达的蛋白。
了解一个未知蛋白的相互作用网络有助于揭示其功能。本研究通过Pull—down技术垂钓与MSMEG_2731互作的蛋白,并用液相色谱-质谱联用技术鉴定出RPS1、Ercc3等蛋白与MSMEG_2731存在相互作用,随后又利用免疫共沉淀等方法证明了这些相互作用的真实性。RPS1是核糖体30S小亚基中最大的一个核糖体蛋白。RPS1与mRNA上SD序列上游11个核苷酸结合,起到稳定mRNA与核糖体的结合的作用。除了参与翻译的起始之外,RPS1与RNA聚合酶之间也存在相互作用,有可能对原核细胞中转录与翻译的偶联起到重要作用,还可能参与RNA聚合酶的重复利用。Ercc3是一个在真核生物中普遍存在,却只在极个别原核生物中发现的蛋白。在真核细胞中,Ercc3是TFIIH复合物中最大的一个亚基,参与NER和转录的起始,它具有DNA解旋酶活性。MSMEG_2731与RPS1、Ercc3等的相互作用暗示了MSMEG_2731可能参与转录或翻译途径。
另外,研究发现MSMEG_2731是一个核酸结合蛋白,可以结合RNA、单链DNA和双链DNA等形式的核酸。综合实验中获得的信息,我们推测MSMEG_2731可能参与RNA相关的途径,如转录和翻译。由于MSMEG_2731只在分枝杆菌家族和少数其他物种中分布且非常保守,它可能参与分枝杆菌中所特有的生物学途径,对其功能的揭示有助于分枝杆菌生长、致病或耐药等领域的研究。