萎缩芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌的一类变种,在含有碳水化合物的培养基上可形成可溶性黑色菌落。目前,国内外许多研究致力于萎缩芽孢杆菌的应用研究,对该菌的检测方法研究甚少,没有成熟的、简便的方法可供借鉴。因此,本文从萎缩芽孢杆菌生物学特性对其进行系统研究,探索一种快速、准确、可靠的生物检测方法,对今后萎缩芽孢杆菌更广泛、更体系化的应用具有重要意义。本研究借鉴芽孢杆菌的鉴定方法,选用在消毒灭菌上广泛应用的ATCC9372菌株作为萎缩芽孢杆菌的代表菌株进行研究,提出了萎缩芽孢杆菌检测的生理化方法和PCR技术方法。首先,根据生理化试验研究,归纳了萎缩芽孢杆菌的生理化特征,提出了萎缩芽孢杆菌的传统生物鉴定方法：先通过镜检筛选确定芽孢杆菌,然后用API50CHB试剂条检测糖酵解利用能力,最后通过厌氧生长、硝酸盐利用、V.P试验、淀粉分解、10%NaCl生长、精氨酸利用等项目作为萎缩芽孢杆菌的确证项目进行鉴定。其次,在分子检测方面,通过筛选具有种特异性的引物(recA和ITS引物),优化PCR反应的退火温度,最终确定扩增条件。结果显示,萎缩芽孢杆菌对recA和ITS两种特异性引物分别产生131bp和75bp大小的目的条带,而其他9种芽孢杆菌对以上两种引物均无特异性扩增。可见这两种引物具有良好的特异性。最后,用环境样品对萎缩芽孢杆菌的生理化检测方法和PCR技术进行验证试验。两种方法检出效果良好,其中,生理化检测方法技术要求低,适用性广,但是耗时长,操作麻烦,结果不稳定,易受接种菌量及环境变化而变化；PCR鉴定方法准确、迅速,特异性强,但是仪器和技术要求相对较高。综上所述,本论文成功建立了萎缩芽孢杆菌的生物检测方法—生理化鉴定方法和PCR技术,为萎缩芽孢杆菌应用研究和开发提供了便利。