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本研究以水牛卵泡颗粒细胞作为线粒体的来源细胞,初步探讨水牛卵母细胞进行线粒体移植(MIT)对其发育潜能的影响,以期提高水牛卵母细胞的质量和胚胎的发育能力。首先,探讨了水牛卵泡颗粒细胞的分离培养方法及线粒体活性的检测。结果显示：从卵泡液中分离得到的颗粒细胞活率为60%左右；采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基,细胞培养24h后开始零星增殖,3-5d增殖速度达到高峰；分别对第1、3、5、7代颗粒细胞的核型、凋亡率及其线粒体活性分析发现：第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上；第1代颗粒细胞的凋亡率(7.67±0.23%)与第三代(7.62±0.36%)差异不显著,但与第5代(8.26±0.19%)和第7代(9.35±0.47%)相比,颗粒细胞的凋亡率显著上升(P<0.05)；而线粒体的活性会随着颗粒细胞体外培养代数的增加呈下降趋势。其次,研究了水牛卵母细胞质量及发育潜能与线粒体DNA (mtDNA)拷贝数的关系。通过实时荧光定量PCR (QRT-PCR)技术对体外成熟不同级别卵母细胞的mtDNA拷贝数进行测定,结合不同级别卵母细胞孤雌激活胚胎的发育情况,分析卵母细胞质量及发育潜能与线粒体DNA (mtDNA)拷贝数的关系。结果显示：一级卵母细胞组的平均mtDNA拷贝数极显著高于二、三级卵母细胞组(202101±34432vs118483±17028,39177±7938,P<0.01),二级卵母细胞组的平均mtDNA拷贝数极显著高于三级卵母细胞组(118483±17028vs39177±7938,P<0.01)；孤雌激活处理后发现：一级卵母细胞组的卵裂率和囊胚率也都极显著高于二、三级卵母细胞组(P<0.01),而二级卵母细胞组激活后胚胎的卵裂率和囊胚率亦都极显著高于三级卵母细胞组(P<0.01)。此外,探讨了线粒体移植对卵母细胞发育潜能的影响。主要研究了外源线粒体移植后在早期胚胎中的分布情况,及MIT对胚胎发育潜能及胚胎线粒体膜电位的影响。结果显示：用Mito-Tracker探针标记的外源线粒体经移植后,会随着胚胎的发育而发生移动,分布到各个卵裂球中,至桑椹胚期仍有部分细胞可以观察到微弱荧光,但随着胚胎的发育荧光强度会逐渐消弱；孤雌激活处理后发现,二级卵母细胞MIT组囊胚率显著高于对照组和空注组(27.3%VS17.4%,7.84%,P<0.05),而三级卵母细胞MIT组的囊胚率与对照组和空注组无显著差异；对胚胎△Ψm检测发现,水牛植入前各时期胚胎△Ψm总体呈上升趋势,且MIT组的2-细胞、4-细胞、8-细胞期、桑椹胚期和囊胚期△Ψm均显著高于对照组(P<0.05)。以上结果表明：(1)初步建立了水牛卵泡颗粒细胞的分离培养方法；(2)培养的第1～3代水牛颗粒细胞可用于提取线粒体；(3)不同质量的水牛卵母细胞其mtDNA拷贝数存在显著差异,且mtDNA拷贝数与卵母细胞质量和胚胎发育的能力成正相关；(4)外源线粒体移植后在胚胎内可以存活一定时间,并参与了早期胚胎发育的过程；(5)MIT可以提高水牛二级卵母细胞的胚胎发育潜能。