目的:构建兔源单链抗体噬菌体库,筛选免疫组化(IHC)用抗雌激素受体(ERα)抗体,探讨利用噬菌体展示技术筛选应用于免疫组化中高亲和力抗体的可行性。方法:用ERα重组蛋白免疫新西兰大白兔,提取淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,利用PCR技术扩增重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)片段并拼接为scFv基因,构建pCANTAB5E-scFv重组质粒,电转化至E.coli TG1感受态细胞构建噬菌体单链抗体库;通过ERα阳性乳腺癌组织切片和ERα重组蛋白对抗体库进行5轮亲和富集,利用phage-ELISA法和ERα高表达的乳腺癌细胞(T47D)免疫化学相结合的方法筛选阳性克隆子;通过基因测序获得该阳性克隆子scFv序列,构建重组质粒Pet-27b(+)-scFv并转化至E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中诱导表达,亲和镍柱分离纯化scFv重组蛋白;运用IHC评估该单链抗体的应用价值。结果:1、成功提取兔淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,扩增VH和VL片段并拼接为scFv基因。2、成功构建pCANTAB5E-scFv重组质粒,电转化至TG1感受态细胞,建立了库容量为1.92×107、重组噬菌体滴度为1.57×1012pfu/mL、重组率为95%的噬菌体单链抗体库。3、特异性富集噬菌体单链抗体库,成功筛选出一株阳性克隆子B19,基因测序比对其重链可变区同源性为96.1%,轻链可变区同源性为92.4%。4、成功将B19-scFv克隆到pET-27b(+)原核表达载体,转化到大肠杆菌Ecoli Rosetta(DE3)中诱导表达,分离纯化获得B19-scFv重组蛋白,该单链抗体在IHC检测结果中显示核定位清晰,背景染色和非特异性染色较少。结论:本研究构建并鉴定了兔源scFv噬菌体抗体库,并从中筛选了具有抗ERα活性的兔源单链抗体,免疫组化检测显示具有良好染色效果,结果表明噬菌体展示技术可应用于免疫组化中高亲和力抗体的筛选。