山核桃外植体诱导培养及褐化机理的初步研究

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本研究通过山核桃外植体筛选,基本培养基类型筛选,灭菌方法的筛选,抗褐化方法筛选,植物生长调节剂配比等方面进行山核桃外植体诱导的研究,并结合外植体生化指标以及细胞切片的观察,进行山核桃外植体诱导培养及褐化机理的初步研究,为加速山核桃品种选优和品种苗木的繁育提供一定的理论基础。本研究主要内容如下:(1)通过对3种不同外植体的筛选得出,带芽茎段为最佳外植体,它既能诱导出愈伤组织,其叶芽也能萌发,愈伤组织平均诱导率为86.43%;叶芽平均萌发率为45.29%。(2)通过对4种基本培养基的筛选得出,WPM培养基为山核桃诱导培养的最适培养基。WPM培养基的平均褐化率相对较低,为40.35%,且叶芽诱导萌发率相对较高,为45.34%。(3)通过对8组灭菌试验得出,最佳的灭菌方法为1000倍多菌灵浸泡30min,蒸馏水冲洗干净,75%酒精浸泡60s,蒸馏水冲洗3次,0.1%升汞浸泡10min,蒸馏水冲洗3次。此种灭菌方法的平均污染率为26.21%,叶芽诱导萌发率为44.91%。(4)抗生素对外植体抗污染效果显示:向培养基中添加200mg/L青霉素钠的抗污染效果较好,平均污染率仅为7.80%。(5)通过Vc,Na2S2O3,AgNO3,PVP4种化学抗褐化剂的正交试验得出,向培养基中加入Vc100mg/L+Na2S2O30.2mg/L+AgNO30.10mg/L+PVP0.1mg/L,能有效抑制外植体褐化,其褐化率为22.23%,叶芽萌发率为43.80%。(6)茶叶和番茄两种天然抗氧物的抗褐化试验显示,向培养基中添加3.0g/L的茶叶具有较好的抗褐化效果,其平均褐化率仅为31.59%,叶芽平均诱导萌发率为46.23%。(7)天然有机抗氧化物与化学抗氧化剂组合抗褐化试验结果显示,3.0g/L的茶叶配合0.10g/L的AgNO3抗褐化效果最好,平均褐化率仅为23.07%,叶芽萌发率为45.47%。(8)通过培养初期的低温暗培养试验得出,前期10℃,2d的低温暗培养对于外植体褐化有一定的抑制效果,其平均褐化率为21.24%,叶芽平均萌发率为为46.07%。(9)通过对4种植物激素配比试验得出,2.4-D0.50mg/L+IBA0.20mg/L+6-BA0.05mg/L+KT1.00mg/L,为最佳激素配比,愈伤组织平均诱导率为94.38%,叶芽萌发率为46.46%。(10)通过对带芽茎段体内4种生化指标的测定显示,褐化的带芽茎段体内PPO、POD、MDA、SOD活性变化幅度均明显大于未褐化的带芽茎段。PPO、POD、MDA均与与褐化呈现正相关,SOD与褐化呈现负相关。(11)通过对带芽茎段的细胞切片观察显示,随着褐化程度的加深,细胞中积聚大量褐色物质,细胞膜逐渐破裂,失活,死亡;褐色物质的出现可能与PPO、POD活性的增加有关。
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