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[研究背景和目的] 心肌细胞在从代偿性肥大直到进入失代偿的过程中始终伴随着能量代谢的变化,包括代谢底物利用、产能结构、耗能结构等的变化。能量贮存减少、耗能增加、代谢产物的堆积都加重心肌细胞的代偿压力,能量代谢障碍可能是肥大心肌转入失代偿的机制之一。 黄芪首载于《神农本草经》,是补气药的代表药,在临床上应用于病毒性心肌炎、冠心病、心力衰竭等疾病的治疗。研究已经证实,黄芪对缺血再灌注损伤、缺氧、肥大的心肌细胞有保护作用。其作用机制可能与保护细胞超微结构特别是线粒体的结构,增强呼吸链中酶的活性,提高细胞内 SOD 活性,改善心肌细胞能量代谢有关。 为进一步探讨黄芪对肥大心肌细胞能量代谢的影响,本实验从细胞水平出发,利用先进的仪器设备,重点研究血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ.AngⅡ)诱导心肌细胞肥大过程中心肌细胞活性的变化,观察黄芪对肥大心肌细胞能量代谢相关酶的活性和线粒体膜电位的影响,为从能量代谢角度探讨中医药防治心肌肥厚、心力衰竭提供参考。 [材料和方法] 根 据 Harary报 道 的 方 法 培 养 乳 鼠 心 肌 细 胞 , 分 为 空 白 组 、 AngⅡ 组 、Lorsartan组、黄芪组四个实验组。建立AngⅡ诱导心肌细胞肥大的模型;在此基础上,加入黄芪注射液,选取 0h、12h、24h、48h、72h、96h六个时点,采用MTT法分别观察 10-3g/L、10-4g/L、10-5g/L、10-6g/L、10-7g/L、10-8g/L六种剂量的黄芪注射液对肥大心肌细胞活性的影响;确定肥大心肌细胞活性最强的时点和有效剂量,分别研究黄芪对肥大心肌细胞内外SDH、LDH活性的影响;选用Rhodamin123(罗丹明)为荧光探针,应用激光共聚焦显微镜观察黄芪对肥大心肌细胞线粒体膜电位变化的影响。 [结果] 心肌细胞总蛋白含量 AngⅡ组较空白组增加,具有非常显著的统计学意义(P<0.01)。 在时点 12h、24h,AngⅡ组的心肌细胞活性高于空白组、Lorsartan 组,具有非常显著的统计学意义(P<0.01);在时点 48h、72h、96h,AngⅡ组的心肌细胞活性低于空白组、Lorsartan 组,具有非常显著的统计学意义(P<0.01),说明 AngⅡ作用下培养的心肌细胞活性在 12h、24h 内持续增强,48h 时活性下降,72h、96h 活性持续降低且低于正常培养的心肌细胞。