脂肪干细胞移植促进扩张皮肤再生的实验研究

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实验背景:组织扩张术是整形外科手术中的一项基本技术。由于皮肤有限的再生能力,使得临床上一般需要4-6个月的扩张周期。如何增加皮肤的再生能力,在较短时间内获得大面积的新生皮肤,仍是整形外科医生面临的难题。组织扩张产生一个类似于组织创伤修复的内环境。而ADSCs移植治疗已被证明可以有效地促进创伤修复。实验目的:观察ADSCs移植是否可以促进扩张皮肤再生,并探讨其机制。实验方法:(1)观察培养ADSCs的上清液对成纤维细胞迁移、增殖及I型胶原基因表达的影响;(2)建立大鼠组织扩张模型,根据移植细胞的不同,将大鼠分为ADSCs组、成纤维细胞组、对照组。每周注水2次,保持扩张器囊内压为60mmHg。扩张4w后统计三组扩张量、扩张面积及回缩率;(3)分别收取1w、2w、4w时的扩张皮肤,观察各组皮肤厚度及皮肤中增殖细胞的数量、胶原含量、血管密度、巨噬细胞及肌成纤维细胞密度;(4)体外诱导ADSCs向内皮细胞和表皮细胞分化,并将BrdU标记的ADSCs回植入体内4w,观察移植细胞的成活情况及分布;(5)观察ADSCs和成纤维细胞中及各组扩张皮肤中VEGF、EGF及bFGF基因及蛋白的表达。实验结果:(1)培养ADSCs的上清液可以促进成纤维细胞的迁移、增殖和I型胶原基因表达,其效果呈现剂量依赖性;(2)ADSCs移植后组织扩张量和扩张面积均增加,而回缩率减小;扩张结束后ADSCs组各层皮肤厚度均高于其余两组,而纤维囊的厚度未出现统计学差异;(3)ADSCs组扩张皮肤中增殖细胞数量增多,主要出现于表皮基底层和毛囊中;ADSCs组扩张皮肤中含有更多的羟脯氨酸,胶原排列也更致密;扩张结束后ADSCs组的毛细血管密度高于其余两组;7d时ADSCs组皮肤中的巨噬细胞密度和14d时的肌成纤维细胞密度和其余两组无统计学差异;(4)体外诱导7d后,ADSCs可以分化为内皮细胞和表皮细胞;BrdU标记的ADSCs在扩张4w时依然有少部分出现于扩张皮肤的皮下组织,部分细胞出现在血管及毛囊结构中;(5) EGF和VEGF基因及蛋白的高表达出现在ADSCs及ADSCs移植后的扩张皮肤中。结论:ADSCs移植后可以通过直接参与皮肤组织结构及分泌EGF和VEGF发挥促进扩张皮肤再生的作用。
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