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目的：探讨小鼠GITRL蛋白(mGITRL)在小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)发生发展过程中的作用,进一步研究其作用机制及其作为预防治疗靶点的可能性。
方法：⑴首先获取小鼠甲状腺球蛋白(mTg)和mGITRL蛋白,并纯化和鉴定；⑵根据文献,应用小鼠甲状腺球蛋白诱导CBA小鼠,建立小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型；⑶对EAT模型小鼠分组进行干预:尾静脉分别注射mGITRL蛋白、对照蛋白(变性mGITRL)和PBS；⑷ELISA法检测各组小鼠血清中甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平和特异性；⑸对各组小鼠甲状腺进行病理切片和HE染色,观察甲状腺病理变化情况；⑹检测小鼠甲状腺组织、局部淋巴结以及脾脏中Th17细胞的变化。
结果：①成功建立了小鼠甲状腺球蛋白诱导的小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎EAT模型,EAT模型小鼠体内检测出自身甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺组织可见淋巴细胞的浸润；并且比较三组不同干预对EAT模型小鼠的作用结果发现:用mGITRL蛋白干预的EAT模型小鼠的自身甲状腺球蛋白抗体(TgAb)的水平和甲状腺组织淋巴细胞的浸润程度都比对照蛋白(变性mGITRL)和PBS干预组高。②对三组不同干预的EAT模型小鼠的脾脏淋巴细胞计数后发现,与EAT组小鼠(8.50×107±1.40×107)和CTL-EAT组小鼠(8.75×107±2.25×107)相比,GITRL-EAT组小鼠用脾脏中细胞数目显著性增加(1.13×108±2.40×107)；同时经流式细胞术检测发现,小鼠脾脏中Th17细胞的比例,与EAT组小鼠(4.83％)和CTL-EAT组小鼠(4.79％)相比,GITRL-EAT组小鼠(6.96％)脾脏中Th17细胞的比例显著性升高；小鼠颈部淋巴结中Th17细胞的比例,与EAT组小鼠(1.00％)和CTL-EAT组小鼠(1.28％)相比,GITRL—EAT组小鼠(1.92％)颈部淋巴结中Th17细胞的比例显著性升高。③用qRT-PCR测定三组不同干预的EAT模型小鼠的甲状腺组织中IL-17表达发现:GITRL-EAT组小鼠甲状腺组织中IL-17表达量明显高于CTL-EAT组和EAT组。
结论：通过对小鼠甲状腺球蛋白诱导的小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎模型干预研究显示,mGITRL蛋白增加了模型小鼠的自身甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平和甲状腺组织的淋巴细胞浸润,这就说明mGITRL蛋白可以加速并加重小鼠EAT的发病过程；mGITRL蛋白增加了模型小鼠的脾脏中Th17细胞的比例和甲状腺组织中IL-17表达。这就提示mGITRL蛋白在自身免疫性甲状腺炎的发生、发展中起着重要的促进作用。