【摘 要】
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目的: 抗体的高效表达是制备有应用价值的治疗性抗体的重要前提,目前小分子抗体在基础研究、临床诊断和治疗中的广泛应用使之成为研究热点。为了提高产量并获得高结合活性
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目的: 抗体的高效表达是制备有应用价值的治疗性抗体的重要前提,目前小分子抗体在基础研究、临床诊断和治疗中的广泛应用使之成为研究热点。为了提高产量并获得高结合活性的抗人肝癌嵌合Fab抗体,我们利用大肠杆菌和巴氏酵母高效表达抗人肝癌嵌合Fab和F（ab’）2两种形式的抗体形式,并分析其与相应抗原的结合活性,进而明确基因工程抗体大规模培养的可行性。产物经过鉴定和纯化,得到高表达的抗人肝癌嵌合Fab并为其下一步应用研究打下基础。 方法:根据研究目的,实验内容共分为四个部分: 1 抗人肝癌基因工程双价嵌合Fab抗体两种形式的载体构建和原核非融合表达及复性 以克隆载体pET32/cFab为模板,用设计的含有相应酶切位点的特异引物扩增cL、cFd基因,,并分别通过PCR延伸直接得到了Linker32和Lingker21连接序列,之后分别连接成两对匹配序列:①cL-Linker32-cL和cFd-Linker32-cFd,②cL-Linker21-cL和cFd-Linker21-cFd,之后对以上CL和cFd片段酶切,将cL序列克隆入原核表达载体pET21a后,而将cFd序列克隆入
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