蜂胶保肝活性成分的分离及其保肝机制初探

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蜂胶是蜜蜂采集植物的树胶,并混入其上额腺分泌物和蜂蜡经蜜蜂咀嚼调制而成的一种胶状物质,具有抗菌、抗真菌、抗病毒、消炎、抗氧化、抗癌等广泛的药理活性,对于防止肝功能损伤确有其效。本文对蜂胶的保肝活性成分进行了分离鉴定并对其保肝机制进行了初探。蜂胶通过分级提取和减压干燥,将蜂胶分为40%水溶部分,40%醇溶部分,70%水溶部分、70%醇溶部分和95%醇提5个组分。以四氯化碳造成L-02细胞损伤为模型研究蜂胶组分及化合物的保肝功效。结果显示,40%醇溶部分、70%醇溶部分和95%醇提部分具有明显的保肝活性,为蜂胶中保肝活性部位。各活性部位通过其抗氧化活性和抑制CYP2E1的作用减轻四氯化碳所致L-02细胞的氧化应激损伤;并通过抑制氧化应激引起的线粒体肿胀,进而抑制Caspase-3的活化,阻断了细胞凋亡。从3个活性部分分离得到如下21种化合物:松属素、短叶松素3-O-醋酸酯、高良姜、白杨素、短叶松素-3-O-(丁酸/异丁酸)、咖啡酸苯乙酯、木犀草素-5-甲基醚、3’,4’,5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮、异鼠李素、短叶松素-5-甲基醚-3-醋酸酯、未知物A、芹菜素、未知物B、未知物C、槲皮素-3-甲基醚、槲皮素、对香豆酸、异阿魏酸、水杨酸、阿魏酸、山奈酚。三个未知物已经送核磁进行检测。21种化合物中山奈酚、3’,4’,5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮、咖啡酸苯乙酯、异鼠李素、槲皮素对肝损伤具有极显著的保护能力。IC50值依次为为0.3576μM、0.1987μM、0.1913μM、0.3611μM、0.2327μM。其中咖啡酸苯乙酯的活性最强,其次是3’,4’,5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮,略逊于水飞蓟宾(0.1888μM)。各活性化合物通过清除自由基、抑制脂质过氧化、提高细胞清除超氧阴离子的能力,减轻了细胞膜在氧自由基攻击下的损伤程度,起从而到保护受损肝细胞的功效。除对香豆酸、异阿魏酸、阿魏酸、水杨酸之外其余的17种化合物保肝作用随着浓度增加而增加。蜂胶中黄酮类化合物保肝活性同其结构相关,黄酮类化合物清除自由基活性会随B环上羟基数目的增加而增加。槲皮素和3’,4’,5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮在B环的C3’和C4’位置上各有一个羟基,其保肝活性大于在B环上只有一个羟基(如芹菜素)和没有羟基(如白杨素)的化合物。40%醇溶蜂胶的保肝活性在低浓度时大于高浓度,从40%醇溶物中分离得到对香豆酸,水杨酸,阿魏酸的保肝活性会随着浓度的增大而减小,异阿魏酸的保肝活性和浓度关系不明显。因此我们推断蜂胶中的这四种酚酸会随着浓度的增加而影响到蜂胶40%醇溶物的保肝活性。本文的最大贡献在于首次从蜂胶中分离得到化合物——3’,4’,5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮,并通过实验证明该化合物能够显著改善L-02细胞由于受到四氯化碳的损伤而引起的MDA含量升高,SOD活性降低和LDH漏出率的上升,保肝活性略逊于临床使用的经典保肝成分水飞蓟宾,与咖啡酸苯乙酯同为蜂胶中重要的保肝活性化合物。分离纯化到蜂胶中的新化学成分(3’,4’,5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮)并证实其保肝活性将会对蜂胶生物活性的研究起到一定推动作用。
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