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背景泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)是真核细胞体内蛋白质降解的主要途径[1]。真核细胞体内80%-90%的蛋白质是经过泛素-蛋白酶体途径进行降解的[3],其介导的蛋白质的特异性降解参与细胞内许多重要的生理生化过程。随着近年来对其研究的不断深入,发现机体内UPP功能的紊乱与许多疾病的发生发展密切相关[4,51。其中,UPP在肿瘤的发生发展过程中有着极为重要的作用。泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)由泛素(ubiqutin, ub)、泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,E2)、泛素连接酶(ubiquitin-ligase enzyme,E3)、26S蛋白酶体和去泛素化酶(deubiquitination enzyme,DUB)组成[3]。TRIM25(Tripartite motif25),又名EFP (Estrogen-responsive Finger Protein),是由TRM25基因编码的蛋白质,属于TRIM家族的一员。许多TRIM家族蛋白都具有E3连接酶的功能。已有研究证实,TRIM25作为E3连接酶在乳腺癌的发生发展中有着重要的作用。迄今对TRIM25与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)发生发展的关系仍知之甚少。鉴于此,本课题就泛素连接酶TRIM25在NSCLC中的功能及其机制展开研究。第一部分泛素连接酶TRIM25在临床NSCLC中表达水平及功能研究目的TRIM25与NSCLC发生发展之间的关系仍不明确。本部分比较TRIM25在肺癌组织及癌旁组织中蛋白水平的表达差异。方法采用蛋白免疫印迹的方法,比较42例病人肺癌组织及癌旁组织中TRIM25蛋白表达水平的差异。结果Western Blot结果显示42例病人中有31例病人肺癌组织中TRIM25的蛋白水平高于癌旁组织,其中肺腺癌25例,19例(76.00%)病人肺癌组织中TRIM25的蛋白水平高于癌旁组织；肺鳞癌17例,12例(70.59%)病人肺癌组织中TRIM25的蛋白水平高于癌旁组织。结论TRIM25在临床NSCLC肺癌组织中存在异常高表达。第二部分泛素连接酶TRIM25对肺腺癌细胞株迁徙的影响目的探索过表达TRIM25对肺腺癌细胞株迁徙能力的影响。方.法选取H1299肺腺癌细胞株,构建TRIM25稳定高表达细胞株H1299(TRIM25)及其对照株H1299 (control),通过划痕实验比较两种细胞株在细胞迁徙方面的差异。结果H1299(TRIM25)细胞的迁徙能力明显强于H1299 (control)细胞。结论过表达TRIM25可以促进肺腺癌细胞的迁徙。第二部分TRIM25在发生发展中分子机制研究目的探索TRIM25促进NSCLC发生发展的机制,寻找其作用的下游信号通路方法(1)在肺腺癌细胞株中过表达TRIM25,采用Western Blot检测P相关通路基因蛋白质水平的变化： (2)利用雷帕霉素处理TRIM25稳定高表达细胞株H1299(TRIM25)及其对照细胞株诱导细胞自噬,采用Western Blot检测观察过表达TRIM25对肺腺癌细胞自噬过程的影响； (3)通过Western Blot及免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation)探究TRIM25对抑癌基因同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白质的稳定性及泛素化修饰水平的影响；(4)采用MTT的方法,检测过表达TRIM25及沉默TRIM25对肺癌细胞顺铂敏感性差异的变化。结果(1)在肺癌细胞中过表达TRIM25后,随着TRIM25蛋白水平的增高,P53的蛋白水平呈下降趋势,：在H1299肺腺癌细胞中过表达TRIM25后,随着TRIM25转录水平的增高,磷酸化AKT、磷酸化mTOR蛋白水平呈上升趋势,但是AKT、mTOR蛋白水平无明显变化； (2)分别用雷帕霉素处理TRIM25稳定高表达细胞株H1299(TRIM25)及其对照细胞株诱导自噬。结果显示,同等浓度的雷帕霉素作用下,H1299(TRIM25)自噬水平明显低于其对照株,诱导自噬所需的雷帕霉素作用浓度亦高于其对照株； (3)在人胚源肾细胞HEK293T中共转myc-TRIM25、Flag-PTEN、HA-ub质粒,当转染TRM25后,PTEN的泛素修饰水平上升,但不影响其蛋白质的稳定性； (4)在肺腺癌细胞H1299中过表达TRIM25后,细胞对顺铂的敏感性下调,将大细胞肺癌细胞H460中TRIM25沉默后,细胞对顺铂的敏感性上调。结论中过表达TRM25可以降低P53蛋白的稳定性,激活AKT-mTOR信号通路进而抑制细胞的自噬；TRM25可以介导PTEN发生泛素化但不影响其蛋白的稳定性；TRM25可以负向调控肺癌细胞对顺铂的敏感性。