食品安全是全球性重大战略问题,不仅涉及到消费者的健康,而且关系到一个国家经济的正常发展,关系到社会的稳定和政府的威望。当前,食源性致病菌污染是食品安全的首要问题,迫切需要研究开发各种快速便捷的致病菌检测技术,因此本研究以可视芯片技术为基础,以常见的食源性致病菌的特异性序列为检测目标,建立了一套新型致病菌可视芯片检测技术。针对沙门氏菌属、志贺氏菌属、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、空肠弯曲杆菌、大肠杆菌O157:H7型、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、阪崎肠杆菌和铜绿假单胞菌等常见的食源性致病菌,分别以23S rDNA基因序列和致病菌特异性基因序列为靶序列,设计引物和探针,并利用所设计的引物扩增致病菌DNA。将扩增产物回收测序,再与设计的引物和探针序列进行比对,分析所设计引物的扩增效果。将11种特异性探针连同阳性对照一起点到空白芯片上,制成致病菌检测用的可视芯片,并与经过特异性引物PCR扩增的模版DNA进行杂交,杂交后与辣根过氧化酶抗体反应,成功杂交的位点会在金黄色的背景上产生明显的蓝色圆点,而没有杂交反应发生的位点则与背景颜色相同。借此可以判断探针是否与PCR扩增产物发生特异性的结合,从而确定该模版DNA中是否有相应的致病菌。在对PCR产物进行了实验和分析后发现,rDNA基因保守性相对较强,并不能达到致病菌种间甚至血清型间鉴定的要求,而特异性基因序列种间差异较大,特异性明显,其结果在致病菌鉴定上具有较高的可信性,因此本论文选择特异性序列为引物和探针设计的目标序列。利用特异性探针制成的可视芯片,在杂交反应后均在金黄色背景下显示对应的蓝色杂交位点,杂交结果清晰明确,特异性强,背景污染低。通过多次实验证明该芯片实验操作简便,反映耗时少,实验结果可靠,具有很好的稳定性和重复性。芯片检测灵敏度可达到8.5×101 cfu/mL,如经过过夜增菌反应灵敏度可低至0.4 cfu/g。本实验建立了一套致病菌可视芯片检测技术。该技术可以一次检测出2个属和9个种的常见致病菌,且实验表明该技术灵敏、高效、准确、简便、高通量、实用性强,并摆脱了基因芯片在杂交结果分析阶段对荧光扫描仪的依赖,杂交结果明显直观。为致病菌的检验提供了新的思路和方法。