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异丙酚是一种广泛应用于临床的镇静催眠麻醉药,近期研究显示异丙酚还具有降血压和镇痛的效应,但相关机制尚未见报道。肾素、血管紧张素系统(RAS)是人体内非常重要的体液调节系统,它对心血管系统的正常发育及血压的调节均起着重要作用。血管紧张素原经肾素作用后生成血管紧张素I(AngⅠ),后者经血管紧张素转化酶(ACE)催化可进一步水解成强有力的血管收缩蛋白血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),但同时ACE2可将AngⅡ降解为具有血管舒张效应的Ang-(1-7)。异丙酚是否通过影响ACE2-Ang-(1-7)轴而参与血压调节尚不清楚。Mas受体是Ang-(1-7)的功能性结合受体,也是RAS中与痛觉产生有关的重要组成元件,但异丙酚对Mas受体表达及活性的影响尚未明了。异丙酚应用于临床麻醉时麻醉深度可控性好,具有迅速起效等优势在临床应用广泛,但异丙酚也具有一定的成瘾性。μ-阿片受体在药物耐受及依赖性的产生中具有重要的作用。探讨异丙酚对μ-阿片受体的影响,可明确其产生药物依赖性的机制,有利于异丙酚的更合理使用,具有重要的学术价值和临床应用前景。目的：观察异丙酚对人肺动脉内皮细胞中ACE2的影响,并探讨其对大鼠背根神经节神经细胞Mas受体表达和活性的影响,同时阐明异丙酚对人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体的表达影响及调控机制。方法：(1)异丙酚对人肺动脉内皮细胞ACE2的影响：以原代人肺动脉内皮细胞(HPAEC)为研究对象,利用免疫荧光进行细胞鉴定；Real-time PCR检测不同浓度(1、10、20、40、50umol/L)异丙酚在不同时间点(6、12、18、24、30h)对HPAEC中ACE2mRNA表达的影响；Western Blot检测不同浓度(1、10、20、40、50umol/L)异丙酚对HPAEC中ACE2蛋白表达的影响；检测异丙酚对HPAEC细胞膜上ACE2活性的影响；观察转录抑制剂Act-D对HPAEC异丙酚调节ACE2mRNA表达的影响；观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对异丙酚调节HPAEC中ACE2mRNA表达的影响。(2)异丙酚对大鼠背根神经节神经细胞Mas受体表达及活性的影响：以大鼠背根神经节神经细胞为研究对象,Real-time PCR检测不同浓度(0.1,0.5,1.5和10umol/L)异丙酚在不同时间点(0.5,1,2,4和6h)对大鼠背根神经节神经细胞Mas受体mRNA表达的影响;观察转录抑制剂Act-D对异丙酚调节大鼠背根神经节神经细胞Mas受体mRNA表达的影响；观察磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂LY294002、蛋白激酶C激酶抑制剂Go6983、分裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂PD098059、p38丝裂素原活化蛋白激酶抑制剂PD169316对异丙酚调节大鼠背根神经节神经细胞Mas受体mRNA表达的影响；Western Blot法检测PD169316对Mas受体蛋白表达的影响；观察PD169316对异丙酚调节大鼠背根神经节神经细胞Mas受体与Ang-(1-7)结合活性的影响。(3)异丙酚对人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体的表达影响及调控机制：以人神经母细胞瘤细胞为研究对象,Real-time PCR检测不同浓度(1,5,10和20umol/L)异丙酚在不同时间点(6,12和24h)对人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体mRNA表达的影响；Western Blot法检测不同浓度(1,5,10或20umol/L)异丙酚对人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体蛋白表达的影响；观察转录抑制剂Act-D对异丙酚调节人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体mRNA表达的影响；观察异丙酚对人神经母细胞瘤细胞的细胞膜上μ-阿片受体结合活性的影响。结果：1.异丙酚对人肺动脉内皮细胞ACE2的影响。(1)异丙酚浓度在10-40umol/L时,处理24h的时间范围内具有剂量和时间依赖性,可提高人肺动脉内皮细胞ACE2mRNA水平(P<0.05)。但异丙酚浓度为1umol/L时对ACE2mRNA水平表达无明显影响(P>0.05)。(2) Western Blot检测结果显示异丙酚可增加HPAEC中ACE2蛋白的表达,且在24h内具有剂量依赖性。在处理24h的细胞中,异丙酚呈剂量依赖性提高了HPAEC细胞膜上的ACE2将AngⅡ转化为Ang (1-7)的活性。(3) Real-time PCR分析显示,Act-D可抑制异丙酚对HPAEC中ACE2mRNA的上调作用(P<0.05)。(4)异丙酚在24h时剂量依赖性提高了Akt的磷酸化,而LY294002可消除了异丙酚对Akt磷酸化的影响。2.异丙酚对大鼠背根神经节神经细胞Mas受体表达及活性的影响。(1)异丙酚在浓度范围为0.5-10umol/L可呈时间依赖性提高大鼠背根神经节神经细胞Mas受体mRNA表达(P<0.05)。当异丙酚浓度在0.1-0.5umol/L时对Mas受体mRNA水平无明显影响(P>0.05)。(2)检测结果显示大鼠背根神经节神经细胞Mas受体mRNA水平在经转录抑制剂Act-D处理后有显著降低,Act-D可逆转异丙酚对Mas受体的上调作用(P<0.05)。(3)检测结果显示抑制剂LY294002、Go6983、PD098059对大鼠背根神经节神经细胞Mas受体mRNA的表达无明显影响(P>0.05),而PD169316可明显逆转异丙酚对大鼠背根神经节神经细胞Mas受体mRNA和蛋白表达的上调作用(P<0.05)。(4)异丙酚处理4小时后呈剂量依赖性促进细胞膜上Ang-(1-7)与Mas受体的结合,而此作用也可被PD169316逆转(P<0.05)。3.异丙酚对人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体的表达影响及调控机制。(1)在异丙酚浓度为1-10umol/L时,其在处理人神经母细胞瘤细胞12h内呈时间、剂量依赖性显著提高μ-阿片受体mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。(2)异丙酚可增强人神经母细胞瘤细胞细胞膜上的μ-阿片受体的结合活性。(3)检测结果显示,在含有放线菌素D的培养基中,异丙酚对人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体mRNA水平随时间变化无明显影响(P>0.05)。结论：1.异丙酚可分别通过PI3K/Akt与p38MAPK信号途径上调ACE2和MAS受体的表达及活性,使ACE2-Ang(1-7)-MAS轴与ACE-Ang Ⅱ-AT1轴之间的作用恢复平衡,从而发挥舒张血管和镇痛作用。2.异丙酚可上调人神经母细胞瘤细胞μ-阿片受体的表达及活性,可能与异丙酚的成瘾性有关。