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目的: microRNA(miRNA)是一组非编码小RNA，主要在转录后水平对基因表达行负调控功能。有研究表明，miRNA的异常表达与乳腺癌密切相关。本研究通过筛选验证乳腺癌血清差异性表达miRNA，探讨其作为乳腺癌肿瘤标志物的可行性、对乳腺癌的临床诊断价值以及联合CA15-3检测的临床意义。 方法: 1.分别收集8例乳腺癌组织和癌旁正常组织标本，以及各8例乳腺癌血清和正常对照血清标本。利用二代高通量测序技术Illumina Hiseq2500筛选出乳腺癌血清和乳腺癌组织共同显著性差异表达miRNAs。 2.收集100例乳腺癌血清和40例正常对照血清标本，利用茎环设计的反转录引物，通过实时荧光定量PCR技术验证前期筛选出的miRNAs，得到乳腺癌血清差异性表达miRNAs。分析乳腺癌相关miRNAs与乳腺癌诊断、TNM分期、病理等指标的关系。采用Logistic逐步回归方法筛选出有效miRNAs，建立乳腺癌miRNAs回归方程。应用ROC曲线分析miRNAs对乳腺癌的临床诊断价值，包括:灵敏度、特异性等。 3.利用化学发光微粒子免疫分析法检测乳腺癌血清中CA15-3的含量，应用ROC曲线分析血清miRNAs联合CA15-3对乳腺癌诊断的临床意义。 4.统计学处理:实验数据采用SPSS统计软件（17.0版）进行处理。检测结果均以（(x)±S）表示。miRNAs的相对表达量=2-ΔΔCt，ΔΔCt=(CtmiRNA-CtmiR-39)肿瘤-(CtmiRNA-CtmiR-39)正常组平均值，以Cel-miR-39为参照基因。采用独立样本t检验、Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis T检验比较分析，P＜0.05有统计学意义。 结果: 1.利用二代高通量测序技术Illumina Hiseq2500筛选出10个乳腺癌血清和组织共同显著性差异表达miRNAs:miR-132-5p、miR-125b-1-3p、miR-34c-5p、miR-382-3p、miR-485-5p、miR-323b-3p、miR—598-3p、miR-224-5p、miR-1246、miR-184。 2.利用实时荧光定量PCR技术验证得到4个乳腺癌血清差异性表达miRNAs:miR-382-3p、miR-598-3p、miR-1246、miR-184。与对照组比较，乳腺癌血清中miR-382-3p和miR-1246表达上调，miR-598-3p和miR-184表达下调，差异均有统计学意义(P＜0.05)，其表达水平均与乳腺癌患者的临床TNM分期无相关性(P=0.581，P=0.750，P=0.593，P=0.678)。 3.通过Logistic逐步回归分析筛选出3个有效miRNAs:miR-382-3p、miR—598-3p和 miR-1246，得出Logistic回归方程P=1/[1+e-(1.304X1-5.793X2+2.604X3-1.313)]（方程中的X1、X2、X3分别代表miR-382-3p、miR-598-3p、miR-1246的相对表达量）。 4.ROC曲线结果显示:miR-382-3p、miR-598-3p、miR-1246的ROC曲线下面积分别为0.740、0.939、0.904，检测乳腺癌的敏感度和特异性分别为52％，92.5％;95％，85％;93％，75％。三者联合检测的AUC是0.982，敏感度和特异性是92.5％、99.6％。 5.CA15-3诊断乳腺癌的灵敏度和特异性为66％、65％。miR-598-3p、miR-1246联合CA15-3检测乳腺癌的灵敏度和特异性为96％、95％。 结论: 乳腺癌血清miR-382-3p、miR-598-3p、miR-1246、miR-184具有显著性差异表达。其中miR-382-3p、miR-598-3p、miR-1246为乳腺癌的有效诊断指标，均有较好的灵敏度和特异性，具备作为乳腺癌肿瘤标志物的潜能，三者联合检测比单一检测可以提高乳腺癌诊断效能。CA15-3诊断乳腺癌的灵敏度和特异性较低，较之miR-382-3p、miR-598-3p、miR-1246三者联合，CA15-3联合miR-598-3p、miR-1246可以提高乳腺癌诊断的敏感度，但特异性降低。