目的:1建立木瓜药材的多指标质量控制体系,为完善其质量标准以及控制木瓜配方颗粒原药材的质量提供依据。2综合考察木瓜饮片的质量,为完善其质量标准和优选木瓜配方颗粒的原料提供依据。3比较水煎煮和醇提后再水提两种提取工艺,为木瓜配方颗粒的提取工艺选择提供参考。4建立木瓜配方颗粒质量标准(草案),为有效控制其质量提供科学依据。5研究木瓜药材、饮片、中间品提取物(膏粉)和成品配方颗粒的质量相关性,为木瓜配方颗粒质量的全程控制提供科学方法和依据。方法:1按2015版《中国药典》木瓜药材质量标准项目:运用TLC法鉴别10批宣木瓜药材、HPLC法测定其齐墩果酸、熊果酸总含量,同时考察其水分、总灰分、酸度和醇溶性浸出物。此外,采用HPLC法测定其水溶性有机酸含量。采用稀碱水浸泡后超声提取,电位返滴定法,以苹果酸(C4H6O5)为指标成分计算样品中可滴定总有机酸的含量。利用苹果酸、柠檬酸、苯甲酸和苯酚标准品的滴定试验,考察电位直接滴定与返滴定两种滴定方式。用散点图及Pearson相关系数分析药材总有机酸含量与p H值及单体有机酸含量的关联性。2按2015版《中国药典》木瓜饮片质量标准项目:采用TLC法对10批宣木瓜饮片进行定性鉴别,检查样品的水分、总灰分和酸度。另外,测定其醇溶性浸出物,并采用HPLC法测定所含齐墩果酸、熊果酸总量及水溶性有机酸含量。3通过测定活性成分有机酸(总有机酸、水溶性有机酸、齐墩果酸和熊果酸)的含量,考察木瓜饮片水煎煮和醇提后再水提两种提取工艺,优选木瓜配方颗粒提取工艺。4采用TLC法,以齐墩果酸和熊果酸为指标成分,鉴别10批木瓜配方颗粒;检查样品中水分含量;用电位返滴定法测定总有机酸含量、HPLC法测定水溶性有机酸及三萜酸含量,并建立HPLC特征图谱。5建立木瓜药材、饮片、提取物和配方颗粒的HPLC特征图谱,分析药材-饮片-提取物-配方颗粒的质量相关性。结果:1 10批宣木瓜药材薄层鉴别、水分、总灰分、醇溶性浸出物均符合药典规定。p H值有4批、齐墩果酸、熊果酸总量有5批低于药典规定值。水溶性有机酸含量为1.110%~2.233%。稀碱水提取的样品中总有机酸含量均高于水和75%乙醇提取;浸泡后超声提取的样品中总有机酸含量均高于超声或浸泡;超声提取30min适宜。HCl滴定液及Na OH溶液的浓度为0.1mol/L优于0.05mol/L。电位滴定法消除了提取液颜色过深对滴定终点判断的干扰,滴定曲线有明显突跃。在水相中直接滴定法不能准确测定脂溶性的苯甲酸含量,而返滴定法既能准确测定像苯甲酸这类脂溶性有机酸含量,又能测定像苹果酸、柠檬酸这类水溶性有机酸的含量;像苯酚这样酸性极弱的成分无论直接滴定或返滴定法都无法测定。经方法学验证,该测定方法操作简单,稳定可靠。总有机酸含量为18.50%~32.03%。药材总有机酸含量与p H值、水溶性有机酸含量均存在显著相关,而与三萜酸含量相关性不很明显。2 10批饮片薄层鉴别、总灰分检查符合药典规定,含水量有1批高于药典规定值,p H值有5批低于药典规定值,浸出物含量在25.11%~39.77%,齐墩果酸、熊果酸总量在0.344%~0.518%,水溶性有机酸含量在1.813%~2.697%。3 3批宣木瓜饮片经醇提后再水提工艺制备的提取物中总有机酸平均含量为15.81%,略高于水煎煮工艺制备的水煎剂中的平均含量15.55%;提取物中水溶性有机酸的平均含量为0.528%,低于水煎剂中的平均含量1.386%;提取物中齐墩果酸、熊果酸总量平均值为0.513%,而水煎剂中几乎检测不到齐墩果酸、熊果酸。鉴于木瓜在中医临床亦常用酒制品入药,因此选择采用醇提后药渣水提的工艺制备木瓜配方颗粒。4制定了木瓜配方颗粒的质量标准草案:TLC在同一薄层板上检识木瓜配方颗粒中齐墩果酸和熊果酸,斑点清晰,分离度好;检查项目应符合颗粒剂项下有关的各项规定(2015版《中国药典》四部通则0104);含量测定项目中包括(1)总有机酸测定:以苹果酸(C4H6O5)计,每1g含总有机酸不得少于192.0mg;(2)水溶性有机酸测定:每1g含奎宁酸、苹果酸、莽草酸、原儿茶酸及绿原酸总量,不得少于35.22mg;(3)三萜酸测定:每1g含齐墩果酸、熊果酸的总量不得少于5.0mg;木瓜配方颗粒HPLC特征图谱要求供试品图谱中应呈现5个特征峰,以原儿茶酸峰为S峰,通过计算各特征峰与该峰的相对保留时间,规定其比值应在规定值的±5%。其规定值为:0.23(峰1)、0.25(峰2)、0.85(峰3)、1.00(峰S)、1.63(峰4)。5构建了药材、饮片、提取物及配方颗粒对照特征图谱,对各对照特征图谱进行重叠比较,显示峰形和峰数基本一致,运用指纹图谱相似度软件计算相似度,结果发现:饮片对照特征图谱与药材对照特征图谱间的相似度为0.923,提取物对照特征图谱与饮片对照特征图谱间的相似度为0.965,配方颗粒对照特征图谱与提取物对照特征图谱间的相似度为0.992。结论:本课题建立的木瓜药材多指标质量控制体系和饮片质量考察体系为完善其质量标准以及木瓜配方颗粒原料的优选提供了依据。确定了同时测定木瓜药材活性成分群总有机酸和其中主要活性成分齐墩果酸、熊果酸及水溶性有机酸的质量控制和评价模式。醇提后再水提工艺较传统水煎煮工艺能较大限度地提高齐墩果酸和熊果酸等脂溶性成分的提取率,使木瓜配方颗粒保留了原料中的主要活性成分群,使其药效物质基础与木瓜饮片保持一致。建立了木瓜配方颗粒TLC鉴别法、水分检查、总有机酸电位返滴定法、齐墩果酸、熊果酸及水溶性有机酸的HPLC测定法和HPLC特征图谱,可用于木瓜配方颗粒的质量控制。采用HPLC特征图谱的方法对木瓜药材-饮片-提取物-配方颗粒进行质量相关性分析,能够有效表征木瓜药材、饮片、中间品提取物及成品配方颗粒的物质组成以及有效物质群的变化,具有从药材到配方颗粒化学成分的可追溯性,为木瓜配方颗粒质量的全程控制提供了方法和依据。