原发性女性不孕是一种生殖缺陷疾病，临床上是指育龄女性未曾有过受孕，在婚后一年以上性生活正常且未采取任何避孕措施，依然没有怀孕的情况。约5-10%的不孕妇女是由染色体畸变、单基因或多基因突变和多态性等遗传因素引起的。
　　本文对5个被诊断为原发性女性不孕家系(病例)进行遗传学研究，通过候选致病基因克隆的原理，并结合外显子组测序和生物信息学分析和以及一代桑格DNA测序验证，在其中一个家系中发现了其致病基因WEE2的新突变,并通过生化与分子生物学研究了该基因突变对其功能的影响，阐明其致病的分子机制。
　　对家系先证者及其家庭成员进行遗传学分析，发现家系1的先证者携带致病基因WEE2新的复合杂合突变：c.598C>T(p.Arg200Ter)和c.1319G>C(p.Trp440Ser)，先证者父亲携带c.1319G>C(p.Trp440Ser)杂合突变，先证者母亲携带c.598C>T(p.Arg200Ter)杂合突变，先证者未患病的妹妹携带c.1319G>C(p.Trp440Ser)杂合突变，突变与表型共分离。通过对蛋白质氨基酸的保守性分析和蛋白结构预测发现WEE2蛋白的p.Trp440氨基酸在进化上高度保守，而且该突变位点位于WEE2蛋白的PKinase激酶区域。为了进一步评估这些突变对WEE2蛋白功能的影响，我们将野生型及突变型WEE2基因的cDNA克隆到pEGFP-C1/p3xFlag-CMV-10载体上,并转染HEK293T细胞检测WEE2蛋白在细胞内的表达水平，经WesternBlot分析发现Arg200Ter突变型WEE2基因表达了截短型WEE2蛋白，Trp440Ser突变型WEE2蛋白的表达水平显著降低。进一步我们检测了WEE2蛋白介导的Cdc2磷酸化，将野生型和突变型WEE2基因表达质粒分别转染HEK293T细胞，通过WesternBlot检测WEE2突变对Cdc2蛋白第15位酪氨酸磷酸化(pY15)的影响，结果显示两种突变型WEE2蛋白介导的下游Cdc2磷酸化均显著降低。进一步研究了突变对蛋白定位的影响，我们将野生型和突变型的WEE2和GFP融合基因表达质粒分别转染到Hela细胞中，通过GFP荧光蛋白的细胞定位发现野生型和p.Arg200Ter突变型WEE2蛋白位于细胞核内，p.Trp440Ser突变型WEE2蛋白在细胞核内表达降低，p.Trp440Ser突变型WEE2蛋白在细胞核和细胞质中均有分布。
　　本研究对5个原发性不孕女性患者及其家系进行了遗传学研究，发现了致病基因WEE2新的复合杂合突变：c.598C>T(p.Arg200Ter)和c.1319G>C(p.Trp440Ser)，并通过生化与分子生物学实验对其分子机制进行了解析，研究发现WEE2基因突变显著降低了WEE2蛋白的表达水平。突变的WEE2蛋白使其介导的Cdc2蛋白第15位酪氨酸磷酸化水平降低，进一步导致卵母细胞浆内精子注射(ICSI)的体外受精实验不能形成原核，受精失败。本研究为ICSI体外受精原核形成失败提供了遗传学证据，为女性不孕症的遗传咨询提供了新的理论依据。