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细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells, CIK cells)作为一种临床治疗级细胞,其体外扩增时不允许使用异源血清,必须使用无血清培养基。而目前临床上所用的无血清培养基大多依赖进口,其配方保密,无法针对性地通过调整培养基成份及其浓度配比调控CIK细胞体外扩增的效果和细胞质量,因此,开发具有自主知识产权的无血清培养基意义重大。为此,本文以开发可用于CIK细胞体外扩增的血清替代物为切入点,以体积比为1：1的商业基础培养基DMEM/F12和IMDM的混合而成的培养基为基础培养基,以单个核细胞细胞扩增倍数为指标,采用两水平部分因子实验、中心组合设计以及响应面分析等科学试验法对19种血清成份对细胞扩增的影响进行了考察和分析,最终确定了可支持细胞扩增的7种成份并优化了其浓度,得到血清替代物组合的配方,命名为OSS。将OSS按一定的比例添加到上述基础培养基中制成无血清培养基Optimizer,分别在48孔板和T75方瓶中以半量换液和稀释换液的方式培养单个核细胞14天,以扩增细胞形态、总细胞扩增倍数、细胞组成、CD3+CD56+细胞的扩增倍数以及对K562细胞的杀伤活性为指标,以含10%FBS的RPMI1640和两种商业的无血清培养基SFM1与SFM2为对照,评价了所开发的血清替代物对CIK细胞的扩增效果。结果表明：在48孔板中采用无血清培养基Optimizer扩增所得到的总细胞扩增倍数56.54±18.87明显高于两种商业无血清培养基SFM1的5.14±1.03(p<0.05)和SFM2的3.59±0.56(p<0.05),与含10%FBS的RPMI1640的35.24±20.92相近(p>0.05); Optimizer扩增的细胞中CD3+细胞的比例为97.98%±1.41%,与含10%FBS的RPMI1640的94.34%±1.29%相当(p>0.05)；尽管CD3+CD56+细胞的比例为18.17%±7.38%,低于含10%FBS的RPMI1640中的25.49%±3.35%(p<0.05)；但Optimizer中CD3+CD56+细胞的扩增倍数为440.86±222.89,与含10%FBS的RPMI1640的429.27±249.16相近(p>0.05),并且在两种培养基中扩增的细胞对K562细胞的杀伤活性接近。在T75方瓶中采用Optimizer扩增的总细胞扩增倍数为94.24±70.33,明显高于含10%FBS的RPM11640的40.52±34.54 (p<0.05); Optimizer扩增的细胞中CD3+、CD3+CD56+细胞比例以及CD3+CD56+细胞扩增倍数分别为97.13%±2.63%、13.52%±9.80%和552.05±320.85,与含10%FBS的RPM11640的96.06%+2.41%、12.83%±11.04%和267.99±167.93相当(p>0.05)；在两种培养基中扩增的细胞对K562细胞的杀伤活性二者接近。综上所述,本文成功开发了一种替代血清的替代物组合,可支持CIK细胞的体外扩增。