论文部分内容阅读
拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是中国南方重要的海水养殖蟹类,其抗菌免疫相关研究较为薄弱。本文克隆了5大类11条抗菌免疫相关基因序列,研究其在青蟹胚胎、幼体及成体多个组织中的表达情况,进而分析弧菌刺激对其在成体多个组织中表达量的影响。结果将丰富蟹类免疫学知识,为免疫学方法防控青蟹细菌性疾病积累资料。1、克隆了两种C-型凝集素新基因,Sp-lectin3和Sp-lectin4,其基因组组织分别由5个外显子/4个内含子和4个外显子/3个内含子,前体肽具有C-型凝集素典型的结构特征,即信号肽和一个CRD域。它们在青蟹肝胰腺中表达量最高;除脑和射精管外,在所有组织中Sp-lectin3表达量均低于Sp-lectin4;随着胚胎发育,它们表达量逐渐升高,峰期为溞状幼体。副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）感染上调Sp-lectin3在生殖系统和Sp-lectin4在肝胰腺中的表达。结果表明,Sp-lectin3主要在生殖系统,而Sp-lectin4则主要在肝胰腺中参与青蟹抗细菌感染的免疫反应。2、克隆了三种巨噬细胞迁移抑制因子基因,Sp-MIF、Sp-MIF1和Sp-MIF2。它们的基因组组织均含有3个外显子/2个内含子,并且具有保守的异构酶催化位点。Sp-MIF在成体肝胰腺集中大量表达;Sp-MIF1和Sp-MIF2则在成体多组织以及胚胎和幼体中表达,并且Sp-MIF2表达量均高于Sp-MIF1（除了心脏和幼体）。副溶血弧菌感染上调Sp-MIF在肝胰腺中表达,下调Sp-MIF1在鳃中表达。结果表明Sp-MIF和Sp-MIF1可能参与青蟹抗细菌感染。3、克隆了三个γ-干扰素诱导巯基还原酶基因,Sp-GILT1、Sp-GILT2和Sp-GILT3,前体肽分别由4个外显子/3个内含子4、1个外显子/0个内含子和5个外显子/4个内含子编码,且含有酶催化活性基序CXXS（除Sp-GILT2）和特征基序CQHGX2ECX2NX4C。Sp-GILT1在成体肝胰腺中集中表达,Sp-GILT2主要在生殖系统和消化系统中高水平表达,Sp-GILT3在肝胰腺和血细胞中高水平表达;在胚胎发育早期SpGILT3表达量最高,胚胎发育后期及幼体期SpGILT1表达量最高。副溶血弧菌刺激上调它们在肝胰腺以及SpGILT2在生殖系统中的表达,并下调SpGILT3在射精管中的表达。结果表明,GILT基因在无脊椎动物存在多个变体,并可能参与抗细菌的先天性免疫反应。4、获得一种脂肪酸结合蛋白新亚型,Sp-FABP1。其在成体肝胰腺中表达量最高,在胚胎及幼体发育期有表达,混合菌刺激后下调其在肝胰腺及鳃中的表达,结果表明该基因可能参与多种细菌混合感染的免疫应答;此外,还获得了两个金属硫蛋白基因,Sp-MT1和Sp-MT2,也是在肝胰腺中最高表达,在胚胎和幼体期为基础表达,大眼幼体大量表达。弧菌感染可改变其在多个组织中的表达,结果表明金属硫蛋白基因也可能参与机体抗细菌感染的免疫应答。