马铃薯土传青枯病拮抗菌的筛选鉴定及其生态效应

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马铃薯青枯病是由马铃薯青枯菌Ralstonia solanacearum引起的一种世界性病害,严重威胁到了马铃薯的正常生产,同时由于青枯病为细菌性土传病害,植株感病是系统性侵染,青枯病的防治十分困难。常规的化学防治会造成严重的环境污染,而我国作为世界马铃薯第一生产国,生物防治不失为一条环保、经济、有效的防治途径。本研究对此开展了初步研究,研究结果分述如下:1.本试验通过初筛、复筛得到对马铃薯青枯病具有明显拮抗效果的菌株T3,抑菌圈直径可达到33mm。通过形态观察、生理生化试验和16S rRNA基因同源性序列分析,初步鉴定菌株T3为芽孢杆菌。通过PCR方法发现菌株T3的基因组中含有合成Surfactin. Fengycin、Mycosubtilin和Iturin的拮抗基因sfp、fenB、mycB和ituA。平板对峙试验表明菌株T3对多种病原细菌和真菌有拮抗作用,具有广谱抗菌性。通过培养条件的优化,确定T3在培养温度为30-37℃,装液量为50mL/250mL,初始pH为7.0,碳源为蔗糖,氮源为蛋白胨或酵母粉时可达到最大的生长量。2.采用盆栽试验研究了拮抗菌T3发酵制成的生物有机肥(BF)对马铃薯青枯病的防控效果及促生作用。发现BF可提高马铃薯叶片中的叶绿素含量、光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度,显著增强马铃薯植株的长势,提高马铃薯产量。其中,BF对马铃薯植株的株高、地上部鲜重、地上部干重和马铃薯块茎重的提高率分别为45.3%、130.9%、129.7%和52.0%。另外,BF显示出了对马铃薯青枯病的极显著防效,防控率为79.44%,而单独使用T3菌液(T3)和有机肥(OF)的防控率分别为27.10%和30.84%。BF还可显著降低马铃薯叶片中的过氧化物酶活性、丙二醛含量,和提高马铃薯叶片的超氧化物歧化酶活性。3.采用平板计数和PCR-DGGE方法研究了T3和BF对马铃薯根际微生物区系的影响。发现几个处理中马铃薯根际土壤的细菌数量均随时间表现出先增高后降低的趋势,在结薯期达到最高值。BF处理中,T3菌可有效在马铃薯根际定殖,并显著抑制病原菌的数量,而单独使用T3菌液及OF处理对病原菌数量的抑制作用不显著。细菌多样性分析表明,与CK相比,几个处理均能在一定程度上增加细菌群落多样性,其中BF对其多样性的提高最为明显,在幼苗期、发棵期、结薯期、成熟期和收获期,提高率分别为12.80%、10.17%、14.15%、5.17%和9.49%。真菌多样性分析表明,有机肥能促进真菌多样性的增加,而拮抗菌T3可在一定程度上抑制真菌多样性。
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