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肠道炎症发病率逐年提高,有关其预防和治疗方面的问题已成为国内外重点研究课题,目前对于肠炎的治疗,主要通过药物进行,但药物治疗存在副作用,将益生菌作为生物制剂调节肠道炎症,更具有应用价值。因此,研究实验筛选出的四株干酪乳杆菌M5-L、副干酪乳杆菌Q8-L及鼠李糖乳杆菌L.GG和J10-L的炎症调节作用对其临床治疗应用具有重要意义。本论文首先采用1μg/m L脂多糖(Lps)诱导巨噬细胞,建立细胞炎症模型。然后将四株菌的热致死菌体作用于炎症细胞模型。通过MTT法测定细胞存活率,研究发现:热致死菌体能够增加细胞存活率,Lps存在时的细胞存活率为空白组的61%,加入M5-L、Q8-L、J10-L和L.GG菌株后,细胞存活率分别为预防组:68.9%,70.0%,66.3%,101.8%;共育组:82.12%,65.5%,61.4%,76.7%;治疗组:95.9%,62.2%,64.73%,85.8%。以细胞存活为前提,研究了四种乳杆菌对炎性介质(NO)、促炎(TNF-α,IL-6,IL-1β)和抗炎(IL-10)的调控作用。研究发现:四株乳杆菌热致死菌体均能显著抑制NO,其中L.GG菌株效果最佳,NO含量由阳性对照组278.20 pg/m L降低为预防组122.99pg/m L,治疗组248.28 pg/m L,共育组218.39 pg/m L。同时发现,四株菌均能有效抑制TNF-α的表达,其中Q8抑制效果最佳,TNF-α的表达量由阳性对照组58.95 pg/m L降低为预防组7.90 pg/m L,共育组(3.90 pg/m L),治疗组(8.20pg/m L)。对IL-6和IL-1β的含量,各菌株作用效果不显著,抗炎因子IL-10测定结果显示预防组效果最佳,各菌株均增加至350.00 pg/m L以上。细胞周期测定结果显示,加入Lps后,G0/G1期增加,产生阻滞,使细胞处于增殖活性较低的状态。M5作用的预防组和治疗组中G2/M+S%增加效果显著,共育组中效果不显著。Q8对治疗组中的G2/M+S%增加显著。J10与L.GG均能明显增加G2/M+S%期,同时在预防组和共育组中,S期不同程度的减少。结果表明:乳杆菌能改变细胞周期,使细胞处于分裂旺盛阶段。为进一步测定四种乳杆菌对炎症因子的调控作用,采用RT-PCR方法测定了上游调控因子iNOS、细胞因子TNF-α和IL-6的mRNA水平表达。研究发现:Lps能使细胞内的iNOSmRNA水平显著提高,Q8、J10菌对iNOS的m RNA水平具有显著抑制作用,L.GG组效果更显著,M菌的作用效果不显著;四株菌株均能有效抑制TNF-α的mRNA水平表达;M菌和J菌能够显著地降低IL-6的mRNA水平表达,其中预防组和治疗组作用效果显著,经L.GG菌作用的治疗组不显著,Q8菌促进了IL-6的分泌。研究结果表明:四种热致死菌体对相关炎症因子的调控作用具有差异性。最后,通过western方法测定四种乳杆菌对信号通路中i NOS和NF-κBp65两种蛋白表达变化的影响。研究发现:M5对细胞炎症具有治疗作用且效果较显著;Q8具有预防和缓解细胞炎症作用;乳杆菌J10不能抑制i NOS的蛋白表达;L.GG菌只对预防组具有抑制作用。NF-κB在Lps作用下被激活,促使下游产生多种细胞因子,加速细胞炎症。M5不能抑制NF-κBp65的表达,Q8的治疗组、J10的预防组和L.GG作用的预防组和共育组治疗效果显著。其余实验组的NF-κBp65水平较高,没有抑制趋势。综上,四种乳杆菌对RAW264.7巨噬细胞炎症反应的调控作用存在菌株特异性和作用时间差异性。