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研究背景:
芦荟多糖为芦荟凝胶的主要成分之一。现代药理学研究发现,芦荟多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗突变、抗辐射、抗衰老、抗溃疡、等多种药理作用。研究报道芦荟乙醇提取物、芦荟胶及芦荟多糖对实验性胃溃疡具有显著的治愈作用。但研究主要局限在采用胃溃疡动物模型考察芦荟活性成分对胃溃疡的预防和治疗作用,而其组织、细胞及分子水平的作用机制未见报道。此外,不同品种芦荟中多糖的单糖组成和连接方式不同,其药理活性亦有所差别。本课题所考察的芦荟多糖APS-1是从中华斑纹芦荟中提取纯化得到的均一多糖,经胃溃疡动物模型验证APS-1能够减轻胃黏膜损伤,减少溃疡发生。因而,本课题旨在从组织,细胞和分子三个层面考察APS-1胃黏膜保护作用的机制,为临床应用芦荟多糖治疗胃溃疡提供理论依据。
实验方法:
本研究采用吲哚美锌诱导大鼠胃溃疡,获取胃黏膜组织及血液样品。放射性免疫法检测大鼠胃黏膜中前列腺素(PGE2)含量,血清中表皮生长因子(EGF)含量以及血浆中肿瘤坏死因子(TNF—α)含量。黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法(TBA法)分别测定胃黏膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。通过原代细胞培养的方法获得胃黏膜上皮细胞,并采用[3H]胸腺嘧啶掺入法考察APS-1对胃黏膜上皮细胞增殖的促进作用,以及运用体外细胞迁移模型检测APS-1对上皮细胞迁移的促进作用。在分子水平上,本课题采用实时定量PCR和Western Blot分别考察APS-1对表皮生长因子受体(EGFR)在mRNA和蛋白表达水平上的影响。
实验结果:
在组织水平上,15和30 mg/kg APS-1能够明显抑制吲哚美锌诱导的PEG2(P<0.001)和EGF含量的降低(P<0.001),以及。TNF—α含量的升高(P<0.01),且作用效果均优于阳性对照雷尼替丁。同时APS-1能够使大鼠胃黏膜组织中SOD活性显著升高(P<0.01),并明显抑制MDA含量的增多(P<0.01)。在细胞水平上,100和250礸/ml APS-1均能显著促进胃黏膜上皮细胞增殖(P<0.01),100礸/mlAPS-1对细胞迁移也有明显的促进作用(P<0.01)。此外APS-1提高EGFR mRNA的表达量约3.58倍,与对照组相比具有显著差异(P<0.001)。EGFR蛋白表达的检测尚无定论,初期结果反应APS-1250礸/ml与细胞作用5小时后能够提高EGFR蛋白的表达。
结论:
本研究结果表明芦荟多糖APS-1的胃黏膜保护作用与启动内源性保护机制密切相关:提高大鼠胃黏膜组织中PGE2的含量和血清中EGF含量。同时APS-1能够降低黏膜攻击因素的作用:即减轻大鼠血清和胃黏膜局部氧化损伤、降低炎性因子TNF—α的表达量。此外,APS-1具有直接促进胃黏膜上皮细胞的增殖和迁移的作用,并且这种作用可能部分通过提高EGFR分子的表达量,从而增强了EGFR介导的信号通路,加速上皮重建的进程。