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膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，其发病率在国内居泌尿系统恶性肿瘤第一位，多为移行上皮来源，具有多发生和容易复发的特点。目前以手术治疗为主，术后采用定期膀胱腔内灌注化疗。既往化疗药物大部分是细胞毒性药物，选择性差，毒副作用大，对正常组织细胞损伤大。以肿瘤生物学特点为基础的分子靶向治疗为肿瘤治疗学开辟了新领域，分子靶向性药物以肿瘤细胞的特性改变为作用靶点，具有有效，选择性高和副作用小的特点，因此研究膀胱癌细胞的生物学特性，对于发展膀胱癌新的治疗手段具有重要的意义。
参与调节细胞内多种生物学功能的cAMP，是细胞内重要的第二信使，其浓度的变化影响着细胞内多种生命活动的变化，升高cAMP的药物或cAMP类似物在多种肿瘤细胞上显示了细胞周期阻滞，抑制增殖，促凋亡，诱导肿瘤分化的作用。细胞内cAMP的降解由磷酸二酯酶（PDE）超家族控制，PDE超家族由11个家族21个亚型构成，其分布具有组织细胞特异性，是开发靶向性药物用于疾病治疗的良好靶点，研究PDE亚型在膀胱癌细胞上的表达以及相应特异性抑制剂对膀胱癌细胞的影响，提高治疗药物的靶向性，可为膀胱癌的治疗提供新的方向。
研究目的：
研究PDE亚型在膀胱癌细胞上的mRNA表达水平，同时采用特异性PDE抑制剂筛选出在膀胱癌细胞上起主要的PDE亚型，观察在低剂量情况下，起主要作用的PDE亚型特异性抑制剂联合霍乱毒素（CTX）对膀胱癌细胞形态学，增殖和侵袭等恶性行为的影响。
方法：
1．采用实时定量RT—PCR检测21个PDE亚型在T24膀胱癌细胞上的mRNA的表达水平，倒置相差特异性PDE抑制剂对T24细胞形态改变率的影响，选出对T24细胞形态影响最明显的特异性PDE抑制剂。
2．倒置相差显微镜观察和细胞计数确定PDE4抑制剂—rolipram和CTX不引起T24细胞发生形态改变的最大无效量。
3．倒置相差显微镜观察合用最大无效量的rolipram和CTX对T24细胞形态学的影响。
4．激光共聚焦显微镜观察合用最大无效量的rolipram和CTX对T24细胞骨架蛋白microtubule和actin的影响；western blot检测合用最大无效量的rolipram和CTX对微管解聚的影响。
5．MTT检测合用最大无效量的rolipram和CTX对T24细胞的增殖抑制作用，流式细胞仪检测合用最大无效量的rolipram和CTX对T24细胞周期的影响。
6．划痕实验检测合用最大无效量的rolipram和CTX对T24细胞迁移能力的影响，transwe11实验检测合用最大无效量的rolipram和CTX对T24细胞侵袭能力的影响。
7．ElISA方法检测最大无效量的rolipram和CTX对T24细胞内cAMP聚集的影响。
结果：
1．PDE亚型在T24细胞株上的mRNA表达水平存在差异，PDE1C，PDE4A，PDE4B，PDE5A，PDE8A，PDE9A在T24细胞上有比较丰富的表达。特异性PDE4抑制剂引起T24细胞形态改变最明显。
2．在无血清情况下，Rolipram低于30umol，CTX低于5pg/ml不引起T24细胞发生形态学变化，合用30umolRolipram和5pg/ml CTX明显引起T24细胞发生形态学变化。
3．合用30umolRolipram和CTX5pg/ml明显改变T24细胞microtubule和actin的排列，引起microtubule的解聚，单用Rolipram和CTX不明显。
4．与Rolipram和CTX单用组相比，合用30umolRolipram和CTX5pg/ml在36小时后明显抑制T24细胞的增殖，改变细胞周期进程，降低S期细胞，增加G1细胞。
5．合用30umolRolipram和CTX5pg/ml比较显著的降低T24细胞的迁移和侵袭能力，单用Rolipram和CTX不显著。
6．与Rolipram和CTX单用组相比，合用30umolRolipram和CTX5pg/ml明显升高T24细胞内cAMP的浓度。
结论：
PDE4在T24细胞上有丰富的表达，PDE4特异性抑制剂联合CTX能协同的引起T24的形态学变化，抑制T24细胞增殖和降低T24细胞迁移侵袭能力。