肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的表型鉴定及不同亚群表达差异的研究

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目的:明确肿瘤浸润淋巴细胞(TILs:TumorInfiltratingLymphocytes)在肝癌中存在的表型,比较不同亚群淋巴细胞在肝癌中的表达差异,找出肿瘤组织相对于癌旁组织中存在明显差异的淋巴细胞亚群。内容:1.用流式细胞仪检测鉴定出肝癌中肿瘤浸润淋巴细胞的表型。2.分析各淋巴细胞亚群在肝癌标本淋巴细胞中的表达比例。3.统计分析找出具有差异表达的亚群。4.对研究TILs功能的实验思路及一些初步工作。方法:1.收集临床已经确诊的肝癌手术标本76例、肝癌癌旁组织及血液后提取各类标本的淋巴细胞,采用流式细胞术的方法检测淋巴细胞的不同表型。2.统计各种淋巴细胞在肿瘤、癌旁及血液中的表达比例,以平均值±标准差(单位:%)的方式呈现数据。3.应用SPSS进行统计分析,比较TILs中各种细胞亚型的表达在肿瘤、癌旁及血液中的差异,找出可能具有临床意义的细胞亚群。4.在个体水平上,进行小鼠肝癌模型构建,提取小鼠的肿瘤浸润的淋巴细胞,分选出差异亚群的TILs。结果:1.在肿瘤浸润淋巴细胞中,检测出以下几种表型的细胞:CD3~ CD56~ NKT细胞,CD3~-CD56~ NKG2D~ NK细胞,CD3~-CD56~ NKp30~ NK细胞,CD3~-CD56~ NKp46~ NK细胞,CD3~-CD56~ CD158a~ NK细胞,CD3~-CD56~ CD158b~ NK细胞,CD3~-CD56~ CD158e~ NK细胞,CD3~ CD8~ T细胞,CD3~ CD8~ CCR7~ CD45RA~ T细胞,CD3~ CD8~ CXCR5~ T细胞,CD3~ CD8~ IFN-γ~ T细胞,CD3~ CD4~ T细胞,CD3~ CD4~ CCR7~ CD45RA~ T细胞,CD3~ CD4~ IL-17A~ T细胞,CD3~ CD4~ IFN-γ~ T细胞,CD3~ CD4~ CXCR5~ T细胞,CD4~ CD25~(hi)CD127~(low)T细胞,CD4~ CD25~(hi)Foxp3~ T细胞,CD4~ CD25~(hi)Helios~ T细胞。2.以表格形式汇总了各细胞亚群在肿瘤、癌旁及血液中的表达比例,以平均数±标准差的形式呈现数据。3.肿瘤组织相对于癌旁高表达CD4~ CD25~(hi)Helios~ Treg细胞(P
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