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溶菌酶(lysozyme, LSZ)是水解酶的一种,它广泛存在于鸟类、家禽的蛋清和哺乳动物的眼泪、唾液、血液、鼻涕、尿液、乳汁及组织细胞中,是一种小分子碱性蛋白。长期以来,溶菌酶一直被作为一种“模型”体系,应用于蛋白质空间构象、酶动力学以及结构和活性与分子进化、分子免疫间关系的研究。近年来溶菌酶在食品工业、医学和酶工程中的应用较为广泛。其中,鸡溶菌酶(HEWL)来源丰富,并且蛋白质构象稳定,是溶菌酶类中的典型代表,目前为重点研究的对象。溶菌酶稳定性的研究对于在食品、医学等方面的合理开发利用起到了至关重要的作用。高浓度的盐能够在一定的条件下促进溶菌酶发生聚集,但其具体的作用机制还尚不明确。本文采用生物化学实验和分子动力学模拟相结合的方法研究了鸡溶菌酶在不同浓度的MgCl2、CaCl2、ZnCl2、CuCl2溶液中的聚集特性和结构稳定性。分子生物学实验结果表明,200mmol/L MgCl2、ZnCl2能够显著促进鸡溶菌酶形成二聚体和三聚体,并且随着温浴时间的增长,聚集体越来越明显;CaCl2随着浓度的增加聚集越来越明显,但并未随着时间的增长聚集体有明显的增多;CuCl2不明显。分子动力学模拟分析显示,200mmol/L MgCl2、CaCl2、ZnCl2能够引起螺旋3和螺旋4的显著偏移,同时能够减弱溶菌酶聚集关键区域(40-110位残基)内二硫键Cys76-Cys94的结合强度;另一方面,这些盐也能减少疏水核心内部氢键的数量,促使疏水核心的稳定性显著降低,从而促进了溶菌酶分子间的相互作用。CuCl2影响不大。对于溶菌酶抑菌作用的影响由于高浓度盐自身明显的抑菌效果,生物化学实验无法准确检测,盐的抑菌效果ZnCl2>MgCl2>CuCl2>CaCl2。我们的研究为溶菌酶在应用中的重要作用提出新的依据。