五十二种中药多糖的单糖组成分析及贝母属药材多糖的质量评价研究

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目的:探究不同植物等级的52种中药多糖的单糖组成和含量的差异;以贝母属药材为例的多糖-单糖-寡糖分析相结合的整体质量评价研究。方法:(1)采用水提醇沉法对52种中药多糖进行提取,并使用苯酚-硫酸法测定总糖含量;然后,采用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS进行单糖组成分析和基于LC-MS/MS建立酸、碱体系的17种单糖含量测定方法对52种中药多糖水解后单糖进行测定;(2)贝母属药材多糖采用HPGPC/MALLS/RID测定多糖的分子量分布和FT-IR进行红外光谱轮廓分析;随后采用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS进行单糖组成分析和基于UPLC-DAD进行6种单糖含量测定;然后,采用UPLC-q TOF-MS对部分酸水解后的寡糖进行表征,并基于代谢组学方法进行特征寡糖筛选;最后,评价贝母属多糖对H2O2诱导损伤的H9c2细胞抗氧化应激活减缓作用。结果:(1)52种中药,每种3个批次,共得到156批多糖粉末,粗多糖的提取率在1.20%~43.63%之间,总糖含量在0.45%~39.73%之间;单糖定性分析共鉴定出16种已知单糖和9种未知单糖;酸、碱体系含量测定的方法学考察结果较好,156批样品中各单糖的含量范围:Ery(0.186~9.955 mg/g)、Rib(0.113~6.264 mg/g)、Lyx(0.111~5.284 mg/g)、Ara(0.739~96.475 mg/g)、Xyl(0.115~21.718 mg/g)、Rha(0.193~28.585 mg/g)、Fuc(0.113~73.426 mg/g)、Fru(0.142~35.250 mg/g)、Man(0.464~251.517 mg/g)、Gal(1.126~252.429 mg/g)、Glc(1.142~621.957 mg/g)、All(0.132~6.144 mg/g)、Glc A(0.112~51.577 mg/g)和Gal A(0.133~99.676 mg/g)。(2)9种不同基原贝母属药材,共36批,粗多糖的提取率在4.19%~15.40%之间,总糖含量在0.63%~4.80%之间,36批贝母多糖的分子量分布范围:2.89E5~6.75E6。红外数据筛选的多个差异性变量,可构建模型用于4种贝母及川贝母6个基原的区分和鉴别;单糖定性分析筛选出14种已知单糖,对其中6个含量较高的单糖进的定量分析,方法学考察结果较好,36批样品中各单糖的含量范围:Rha(1.147~4.318 mg/g)、Gal A(2.405~426.692 mg/g)、Glc(58.544~481.282 mg/g)、Gal(4.456~29.494 mg/g)、Xyl(0.293~7.529 mg/g)和Ara(3.545~32.877 mg/g);寡糖分析共筛选出m/z 1401、m/z 1320、m/z 976等特征性成分用于不同基原贝母鉴别;同时,H2O2处理组的细胞上清液中GSH-Px、SOD活性降低,MDA含量增加(p<0.05),经贝母属药材多糖干预后发现CIR,FPB,WAB,UNI具有修复细胞损伤的潜力。结论:(1)52种中药粗多糖的提取率和总糖含量相差较大,单糖组成成分基本相同,含量上存在较大差异,主要包含Glc、Gal、Man、Gal A、Ara、Fuc和Glc A等七种单糖,大部分中药的葡萄糖含量较多,不同植物等级间中药多糖的单糖含量变化规律并不明显。(2)9种不同基原贝母粗多糖的提取率相差较大,川贝母的总糖含量均高于平贝母、浙贝母和伊贝母;贝母属药材多糖分子量分布和红外轮廓存在一定的差异性;36批次贝母多糖的单糖组成相似,以葡萄糖为主,其含量远高于其他单糖成分;特征性寡糖可应用于部分贝母药材的鉴别;抗氧化应激活性分析表明贝母属药材多糖具有修复细胞损伤的潜力。
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