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长段气管切除后的气管重建一直是气管外科的研究重点,主要重建方法有人工气管、自体组织代气管和气管移植。虽然人工气管、自体组织代气管取得了一定的成功,但由于术后并发症、上皮再生和气管通畅度等问题限制了其应用。因此,气管移植可能是最有效的重建方法。
气管和其他器官一样具有免疫原性,移植后会发生免疫排斥反应。动物实验证明气管的深低温冷冻保存可以消减移植气管的抗原性,降低移植排斥反应,同时还能解决供体保存问题。然而,有关人气管深低温冷冻保存的研究还很少,在气管移植应用于临床之前,有必要对人气管冻存后的组织形态及免疫原性改变进行研究,为将来的临床应用提供理论依据。
为此,我们进行了以下实验:取健康成人气管,采用冷冻保护剂经程控降温,液氮冻存1个月和6个月后复温,通过病理学、电镜,研究冻存气管上皮和软骨的组织形态变化和超微结构改变;通过免疫组织化学染色,观察HLAⅡ类抗原在气管组织中的表达改变,并应用流式细胞技术,对HLAⅡ类抗原、抗树突状细胞单抗CloneX-11、抗原递呈细胞共刺激分子CD80和CD86的表达变化进行定量分析。
结果显示:1.与新鲜气管比较,冻存1个月、冻存6个月气管的上皮细胞脱落,基膜完整,软骨形态结构完好,软骨细胞的存活率和超微结构无明显改变。
2.新鲜气管免疫组化染色显示HLAⅡ类抗原表达于气管上皮和上皮下组织,冻存1个月、冻存6个月的气管HLAⅡ类抗原表达减弱。流式细胞技术分析显示冻存1个月、冻存6个月气管组织中HLAⅡ类抗原表达率低于新鲜气管组织,统计学上有显著差异。冻存6个月与冻存1个月气管组织比较,HLAⅡ类抗原表达率无明显差异,但表达率呈下降趋势。
3.与新鲜气管组织比较,冻存1个月、冻存6个月气管组织中CloneX-11、共刺激分子CD80和CD86的表达率均减少,统计学上有显著差异。冻存6个月与冻存1个月气管组织比较,CloneX-11、CD80、CD86的表达率无明显改变,但表达率呈下降趋势。
上述结果提示:1.应用冷冻保护剂、程控降温,人气管可在液氮中冻存6个月,软骨的形态结构和软骨细胞的活性能较好地保留,气管的管腔结构仍能维持。
2.冻存气管的上皮脱落和上皮下组织HLAⅡ类抗原减少是引起冻存气管免疫原性降低的主要原因之一。
3.深低温冷冻保存可以杀伤人气管组织中的低温敏感免疫细胞-树突状细胞,引起抗原递呈细胞的功能受损,这可能是气管冻存后免疫原性下降的一个重要原因。
本课题对人气管深低温冷冻保存后的形态结构改变和免疫原性降低的机理进行初步探讨,为了促进同种异体气管移植尽快地应用于临床,更深入、更精确的研究还有待进行。