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沙门氏菌是导致食源性疾病最重要的病原菌之一,主要感染猪、鸡等食品动物,并通过食物链由动物肉制品传递给人类,从而对公共健康造成危害。家禽被认为是携带沙门氏菌最重要的载体,其中肠炎沙门氏菌血清型分离率较高。目前,由于抗生素的大量使用甚至滥用造成耐药沙门氏菌的产生,这就使得我们迫切寻找一种抗生素替代物。丁酸梭菌由于广谱的抗菌活性、不容易产生耐药等特点以及广泛的生物学功能而备受关注。大量研究表明丁酸梭菌能够增强机体免疫功能、提高动物生产性能、抑制病原微生物生长等作用。然而,丁酸梭菌拮抗肠炎沙门氏菌感染雏鸡的作用机制尚未明确。因此,在了解动物源沙门氏菌耐药特点基础上,开展肠炎沙门菌的致病性研究及丁酸梭菌对其拮抗作用机理探究。主要研究内容如下:1.动物源沙门氏菌耐药特点本研究旨在了解动物源沙门氏菌耐药特点及流行情况。2015年8月到2016年7月年间,从山东省济南、临沂等八个地区山地散养鸡群、鸡屠宰场和猪屠宰场共采集1300份肛门棉拭子样品。沙门氏菌经分离鉴定后,采用平板凝集试验检测沙门氏菌血清型、采用纸片扩散的方法检测沙门氏菌对14种常用抗生素的敏感性,利用多位点序列分型(MLST)方法分析沙门氏菌的ST型。结果显示,本研究共分离到181株非重复沙门氏菌,平板凝集试验将沙门氏菌分为7种血清型,其中最流行的血清型为Enteritidis(30.4%)和Indiana(40.3%);药敏试验结果显示沙门氏菌对氨苄青霉素的耐药率最高为70.0%,多重耐药沙门氏菌分离株所占的比率为69.6%;181株沙门氏菌分离株中Ⅰ类整合子检出率为21.0%,携带的耐药基因盒主要为drfA17-aadA5(1.6Kb);携带的耐药基因主要为blaTEM-1(98.3%),MLST将沙门氏菌分为9种ST型,其中ST17最高为40.3%。该研究通过分析动物源沙门氏菌的耐药特点,为合理选择优质抗生素提供了理论依据。2.肠炎沙门氏菌致病性及丁酸梭菌拮抗其感染肉鸡的作用机理本研究目的主要为探讨肠炎沙门氏菌致病性及丁酸梭菌拮抗肠炎沙门氏菌感染肉鸡的作用机理。将180只1日龄爱拔益加(AA)肉鸡随机分为3组,每组3个重复,每个重复20只。阴性对照组仅饲喂基础日粮,但不感染肠炎沙门氏菌;阳性对照组为饲喂基础日粮并感染肠炎沙门氏菌(106CFU/0.2mL);试验组为在饲喂基础日粮的基础上添加丁酸梭菌(106CFU/0.2 mL),并感染肠炎沙门氏菌(106CFU/0.2mL)。结果表明,与阳性对照组相比,饲喂丁酸梭菌显著的降低了肠炎沙门氏菌在肝脏组织、脾脏组织和盲肠内容中的定植数量(P<0.05),除了在感染沙门氏菌2天后的脾脏组织肠炎沙门氏菌的定植数量没有改变外;同时饲喂丁酸梭菌能够显著的降低由于肠炎沙门氏菌感染引起的细胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-8和TNF-α的表达水平的升高(P<0.05);丁酸梭菌降低肠炎沙门氏菌感染引起的炎症主要是通过降低TLR-4、MyD88和NF-κB信号通路相关蛋白基因的表达来实现的。本研究结果表明丁酸梭菌可作为替代抗生素的益生菌之一,用于抵抗沙门氏菌感染肉鸡。3.丁酸梭菌调控SPF鸡肠道炎症和肠道免疫屏障功能的作用机制本研究利用SPF鸡和肠黏膜上皮细胞为研究对象,用肠炎沙门氏菌作为感染模型,旨在探究丁酸梭菌调控SPF鸡肠道炎症和肠道屏障功能的机制。结果表明,丁酸梭菌显著缓解了由于肠炎沙门氏菌感染引起的血清中sIgA含量的降低;通过下调肠道组织和肠黏膜上皮细胞中TLR4,MyD88和NF-κB信号通路相关基因表达来降低由于肠炎沙门氏菌感染引起的炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-8和TNF-α表达水平的升高;丁酸梭菌缓解了肠道组织和肠黏膜上皮细胞中由于肠炎沙门氏菌感染引起的黏蛋白muc-2和紧密连接蛋白ZO-1的表达水平的降低;丁酸梭菌缓解了由于肠炎沙门氏菌感染引起的外周血单个淋巴细胞中CD4+/CD8+比例的下降;丁酸梭菌缓解了由于肠炎沙门氏菌感染引起肠道优势菌群的比例,增加了菌群的多样性;另外丁酸梭菌造成差异蛋白的数量低于沙门氏菌感染造成的差异蛋白数量,同时上调了药物代谢通路相关蛋白基因的表达水平。总之,丁酸梭菌能够防治由于沙门氏菌感染而造成的炎症疾病,为实现减少抗生素在养殖中的使用提供了重要的理论依据。