研究目的:1、妊娠期糖尿病是最常见妊娠并发症,严重威胁母亲和子代的健康,临床上对该病的诊断时间和干预开始时间多在妊娠中晚期,胎儿在宫内的不良影响已经发生,发现妊娠早期或者孕前的高危因素以及早孕期的诊断标志物,使干预时间提前,对于控制GDM的发生以及疾病程度均具有特殊的意义;2、妊娠期糖尿病的病因及发病机制不明,既往研究往往从单一的蛋白质着手讨论其与GDM之间的关系,对于不同蛋白质之间的相互作用并不能很好的阐述。本研究采用差异蛋白组学研究,全面解析GDM的差异蛋白表达谱,在此基础上挖掘关键的致病因子,为进一步探讨GDM的发病机制、疾病的早期诊断、临床疗效的评估奠定重要的研究基础。对于GDM相关因子的干预和阻断,也将为GDM的临床治疗提供新的策略和思路。材料与方法:1、采用前瞻性研究,收集2015年2月-2015年10月在贵州医科大学附属医院产科门诊建卡的孕妇的基本资料,知情同意的原则下,完成对孕妇基本情况的记录,包括:孕妇年龄、孕产史、文化程度、家族史、身高、孕前体重、血压以及常规的孕检生化指标等。孕妇在妊娠24-28周常规行OGTT,根据结果分为GDM组与非GDM组。对GDM的危险因素进行单因素分析和多因素Logistic回归分析。2、所有入组孕妇在妊娠11-16周、妊娠24-28周两次收集血清标本,经过静置、低温离心、小剂量分装、编号、快速冷冻,贮于-80℃冰箱备用。按照IADPSG诊断标准将人群分成GDM组与非GDM组。每组按照基本情况相似的原则各抽取10例进行蛋白质组学研究。3、通过iTRAQ定量蛋白组学技术筛选GDM组与非GDM组之间差异表达的蛋白质,并对差异蛋白进行GO、疾病关联性、蛋白质相互作用等生物信息学分析。4、选取在妊娠11-16周及24-28周两个时间段均明显变化趋势的APOE、F9、FGA作为候选因子,通过GDM组及非GDM组各30例妊娠11-16周血清标本,进一步用酶联免疫ELISA验证,通过统计学分析判断这几个因子对于GDM早期的诊断价值。结果:1、GDM组与对照组各项危险因子的单因素分析显示:(1)孕妇年龄、孕前BMI、收缩压、舒张压均以GDM组高于非GDM组(P<0.05);(2)两组家族史、产次情况分布差异具有显著性(P<0.05),具体为GDM组有家族史者和分娩次数大于0次者的检出率大于非GDM组;(3)孕期增重、早期空腹血糖、尿酸、白细胞计数组均以GDM组高于非GDM组(P<0.05)。GDM危险因素的多因素Logistic回归分析显示:影响妊娠期糖尿病的危险因素有早期空腹血糖、BMI、年龄、家族史、孕期增重、血尿酸。2、妊娠11-16周GDM组与非GDM组之间的血清差异蛋白组学研究:筛选最终能达到严格定量标准(比值≥1.5或≤0.67,或p<0.05)的蛋白数有33个,上调蛋白有14个,下调蛋白19个。利用OmicsBean数据库对筛选出来的妊娠11-16周阶段的血清差异蛋白进行蛋白质体内的生物学过程分析,发现这些蛋白在体内的生物学过程主要包括血液凝集、损伤应答、急性炎症反应、补体激活等;对差异蛋白进行细胞组分分析,发现这些蛋白质主要定位于细胞外的区域,在孔隙复合物、膜攻击复合物上,以及在脂蛋白颗粒、微粒体上;对筛选出来的差异蛋白质在体内的分子生物学功能进行富集,发现这些蛋白质在体内主要承担着一些内肽酶抑制剂的活性、酶抑制剂的活性、脂蛋白的受体结合、钙离子结合等分子生物学功能。相关疾病有静脉血栓栓塞、心肌梗死、缺血性心脏病、子痫前期、1型糖尿病、2型糖尿病。用Cytoscape软件对GDM早期组与对照血清差异蛋白进行了功能网络分析,结果显示:早期组差异蛋白主要参与了血液凝集、纤维蛋白凝块的形成、血浆脂蛋白颗粒组织、蛋白成熟调控。3、妊娠24-28周的GDM组与非GDM组之间的血清差异蛋白组学研究:经过筛选最终能达到严格定量标准的蛋白数有32个,上调蛋白26个,下调蛋白有6个。用OmicsBean数据库对筛选出来的妊娠24-28周阶段的血清差异蛋白进行蛋白质体内的生物学过程分析,发现这些蛋白在体内的生物学过程主要包括损伤应答、凝集过程的负调节、体液免疫反应等。对差异蛋白进行细胞组分分析,发现这些蛋白质主要为血液微粒子、胞外体、脂蛋白微粒、囊泡等。对筛选出来的差异蛋白在体内的分子生物学功能进行分析,发现这些蛋白质在体内主要承担着一些内酶抑制剂的活性、肽酶调节活性、乙醇结合、丝氨酸水解酶等分子生物学功能。相关疾病有心血管疾病、胰岛素抵抗、心肌梗死、高血压、肾病等。用Cytoscape软件对GDM晚期组与对照血清差异蛋白进行了功能网络分析,结果显示:晚期组差异蛋白主要与急性期反应,血液凝集,蛋白激活级联,极低密度脂蛋白的清除有关。4、将GDM早期组与后期组的差异蛋白进行比较分析,发现共同差异蛋白11个,分别是FA9、FA10、AOPE、FIBA、CO9、C4BPA、C1S、CO7、CO6、PON1、APOA5。利用OmicsBean数据库对筛选出来的GDM组的早期组(11-16周)与后期组(24-28周)共同血清差异蛋白进行蛋白质体内的生物学过程分析,发现这些蛋白在体内的生物学过程主要包括脂质转运的正向调节、损伤应答、体液免疫反应、脂蛋白小体的血浆调节等。对差异蛋白进行细胞组分分析,发现这些蛋白质主要为血液微粒子、脂蛋白微粒、胞外体。对筛选出来的差异蛋白质在体内的分子生物学功能进行富集,发现这些蛋白质在体内主要承担着一些内甾族化合物结合、乙醇结合、脂质转运活性等分子生物学功能。共同血清差异蛋白参与的相关疾病有心血管疾病、心肌梗死、静脉血栓形成、2型糖尿病等。5、ELISA结果显示,妊娠11-16周GDM组APOE、F9、FGA结果均高于同期对照组(P<0.05),AOPE、F9、FGA的曲线下面积均大于0.5(P<0.05),表明对GDM均有较高诊断价值,其中APOE的曲线下面积最高(0.965,P<0.05)。结论:1、孕妇高龄、糖尿病家族史、孕前超重或者肥胖、孕期增长过快、血尿酸高、妊娠早期空腹血糖≥5.1mmol/L均为GDM的危险因素,需要引起重视,早期进行控制血糖的一系列的干预措施;2、GDM的疾病发生可能涉及凝血/纤溶系统、脂肪代谢、补体激活、损伤应答等;3、APOE、F9、FGA有望成为GDM的早期诊断因子。