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目的: 通过观察去势10月龄雌性Sprague Dawley(SD)大鼠下丘脑JNK信号传导通路级联反应和雌激素受体与JNK共表达,探讨调更汤对围绝经期下丘脑神经保护作用及其机制。 方法: 采用去势10月龄雌性SD大鼠模拟围绝经期动物模型,以中药调更汤和西药补佳乐干预,与模型组、空白组比较。通过电镜检测下丘脑神经元细胞包括线粒体、内质网、神经元细胞突触变化,了解调更汤对下丘脑神经元细胞微结构改善作用;以实时定量逆转录聚合酶联反应法(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测各组大鼠下丘脑JNK通路(JNK、MEKK1、ATF2、c-Jun)和Bax、Bcl-2的基因和蛋白的表达,了解调更汤对JNK信号传导通路介导的促凋亡作用的影响;以免疫荧光组织化学法观察雌激素受体(ER)α、β与JNK的共表达,了解调更汤通过ERα、β介导JNK级联通路发挥下丘脑神经保护作用。 结果: 1. 在下丘脑神经元细胞形态学方面,模型组大鼠下丘脑神经元细胞中线粒体大面积水肿,呈空泡状,线粒体体嵴溶解、断裂,基质呈空泡状;突触结构破裂,数目较少。药物干预以后,西药组和中药组大鼠下丘脑神经元超微结构呈不同程度的恢复,细胞器的水肿明显减轻,突触数量明显增多,说明调更汤对去势大鼠下丘脑神经元细胞形态结构有较好的改善作用。 2.1 模型组大鼠下丘脑组织JNK mRNA、MEKK1 mRNA表达量与空白组比较,明显升高(P<0.01,P<0.01);西药干预后,大鼠下丘脑JNK mRNA、MEKK1mRNA水平显著降低(P<0.001,P<0.001);中药干预后,大鼠下丘脑JNK mRNA、MEKK1 mRNA水平显著降低(P<0.001,P<0.001)。 模型组大鼠下丘脑组织JNK、p-JNK蛋白表达与空白组大鼠比较,明显升高;药物干预后,西药组与中药组大鼠下丘脑JNK、p-JNK蛋白表达明显降低。 模型组大鼠下丘脑组织MEKK1、p-MEKK1蛋白表达与空白组大鼠比较,明显升高;药物干预后,西药组与中药组大鼠下丘脑MEKK1、p-MFKK1水平明显降低。 2.2 模型组大鼠下丘脑组织c-Jun mRNA、ATF2 mRNA水平与空白组比较,明显升高(P<0.05、P<0.05);西药干预后,大鼠下丘脑c-Jum mRNA、ATF2 mRNA水平显著降低(P<0.01,P<0.001);中药干预后,大鼠下丘脑c-Jun mRNA、ATF2 mRNA水平显著降低(P<0.001,P<0.001)。 模型组大鼠下丘脑组织c-Jun、p-c-Jun蛋白水平与空白组大鼠比较,明显升高;药物干预后,西药组与中药组大鼠下丘脑c-Jun、p-c-Jun蛋白水平显著降低。 模型组大鼠下丘脑组织ATF2、p-ATF2蛋白水平与空白组大鼠比较,明显升高;药物干预后,西药组与中药组大鼠下丘脑ATF2、p-ATF2蛋白水平显著降低。 2.3 模型组大鼠下丘脑组织Bax mRNA水平与空白组比较,显著升高(P<0.001);药物干预后,西药组和中药组的大鼠下丘脑组织Bax mRNA水平显著降低,与模型组比较存在统计学意义(P<0.001、P<0.001)。 模型组大鼠下丘脑组织Bcl-2 mRNA水平与空白组比较,明显趋势(P<0.05);药物干预后,西药组和中药组的大鼠下丘脑组织Bcl-2 mRNA水平显著升高,与模型组比较存在统计学意义(P<0.001、P<0.001)。 模型组大鼠下丘脑组织Bax蛋白水平与空白组大鼠比较,明显升高;药物干预后,西药组与中药组大鼠下丘脑Bax蛋白水平明显降低。 模型组大鼠下丘脑组织Bcl-2蛋白水平与空白组大鼠比较,明显降低;药物干预后,西药组与中药组大鼠下丘脑Bcl-2蛋白水平明显升高。 3. 通过免疫荧光双标记分析,模型组大鼠下丘脑见很多JNK、p-JNK阳性染色部位,少量ERα、ERβ染色;空白组与模型组比较,JNK、p-JNK(红色)阳性染色部位减少,ERα、ERβ(绿色)染色增多;经西药补佳乐和中药调更汤干预后,大鼠下丘脑ERα、ERβ(绿色)染色明显增多,JNK、p-JNK(红色)阳性染色部位显著减少。 结论: 1. 调更汤对去势大鼠下丘脑神经元细胞形态结构具有改善作用。 2. 调更汤通过抑制JNK信号传导通路,发挥下丘脑神经细胞保护作用。 3. 调更汤通过ERα、β介导JNK、p-JNK信号传导通路。