东北林蛙是我国东北地区珍贵的经济动物,冬眠前期林蛙输卵管膨大形成蛙油,其干燥制品是具有多重药用功效的名贵中药材和保健食品。作为功能食品,林蛙油中含有的性类固醇激素成分尤为引人关注。研究表明林蛙油所含有的性类固醇激素能调节人体的内分泌功能,特别是对更年期女性内分泌紊乱具有调节作用,但林蛀油中性类固醇激素的来源与合成途径及蛙油形成机理并不清楚。本项研究从鲜品林蛙油入手,测定新鲜林蛙输卵管组织中主要性类固醇激素——睾酮、雌二醇、孕酮含量,并通过免疫组织化学、免疫印迹和分子生物学手段,研究雌激素受体(ERα和ERβ)、雄激素受体(AR)、孕激素受体(PR)以及相关性类固醇激素合成酶的表达情况。本想研究对繁殖期和冬眠前期的东北林蛙输卵管进行形态学和组织学比较观察；使用放射免疫测定方法测定输卵管组织中雌二醇、睾酮和孕酮的浓度；用免疫组织化学方法研究输卵管中ERa, ERβ, AR, P R的免疫表达位置；提取冬眠前期和繁殖期输卵管组织总蛋白及总RNA,利用免疫印迹方法检测免疫活性,用RT-PC R方法检测编码基因的表达情况,用Real-Time PCR方法检测基因表达水平变化。形态学结果表明冬眠前期东北林蛙输卵管重量和相对管壁厚度显著高于繁殖期；组织学结果观察到冬眠前期林蛙油中有充分发育膨大的腺体组织,与繁殖期有着显著的区别。激素测定结果表明,输卵管中雌二醇和睾酮的含量相对较高,孕酮含量稍低。其中雌二醇浓度在冬眠前期腺体发育、管腔膨大时达到峰值,睾酮浓度在繁殖期排卵、分泌腺液时达到峰值,提示两种激素对东北林蛙输卵管的发育和功能有着不同的调节作用,而孕激素可能在繁殖期起着更为重要的作用。免疫组织化学结果显示ERaα,AR,PR在两个时期的输卵管上皮和基质细胞都有表达,ERβ则没有表达,提示雌激素在输卵管是通过ERα发生生物学作用；免疫印迹和PCR结果显示ERα在冬眠前期输卵管表达水平较高,而AR和PR则在繁殖期输卵管表达水平较高,进一步验证了不同种类的性类固醇激素在林蛙输卵管发育的不同时期有着不同的调节作用。雌激素合成酶--细胞色素芳香化酶(P450arom)在东北林蛙输卵管基质细胞核上皮细胞中有表达,尤其在冬眠前期的表达量更高,说明林蛙油不仅自身合成雌激素进而刺激林蛙蛙油的形成,同时具有促进机体合成雌激素作用。以上结果表明,林蛙输卵管含有丰富的雌激素、雄激素、孕激素,表达P450arom性类固醇激素合成酶和性类固醇激素受体,提示其具有调节机体雌激素水平,促进机体雌激素的合成等多种调节内分泌功能作用,同时也说明林蛙油具有自身合成雌激素的能力,林蛙输卵管是雌激素、雄激素、孕激素共同作用的靶器官,这些性类固醇激素通过其受体介导,调节林蛙油的形成和功能。