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恩拉霉素(enramycin)是放线菌(Streptomyces fungicidious)分泌的,由不饱和脂肪酸与十几种氨基酸结合的多肽类抗生素。主要成分为恩拉霉素A和恩拉霉素B,还含有少量的恩拉霉素C和D。恩拉霉素对革兰氏阳性菌有良好的抗菌作用,通过抑制其细胞壁前聚物质的合成来影响生物体,特别是对肠内的有害梭状芽孢杆菌(Clostridium)抑制力很强。因其能起到良好的促生长作用,目前作为饲料添加剂使用于畜禽养殖业。本文对Streptomyces fungicidious KS010菌株发酵产恩拉霉素进行了初步研究,主要包括恩拉霉素测定方法的建立、高产恩拉霉素菌株的选育、恩拉霉素发酵条件的优化及上罐培养等内容。首先优化了恩拉霉素的微生物检定法和高效液相色谱法的检定条件,建立了测定恩拉霉素的微生物检定法和高效液相色谱法(HPLC)标准曲线。通过浸提溶液组成、浸提时间、检定菌浓度考察,优化了微生物检定法的检定条件。在检定条件为丙酮浸提液B(丙酮:2mo1/L盐酸:水=20:1:21)、浸提时间80min、检定菌浓度106个/mL的情况下,建立恩拉霉素微生物检定法标准曲线。恩拉霉素浓度在0.56-35.79U/mL之间,其浓度的对数值与相应的抑菌圈直径呈直线相关;回归方程为Y=0.2436X-3.47436,相关系数r为0.9960。通过流动相配比、流速和浸提时间的考察,优化了HPLC的检定条件。在色谱条件为检测波长267nm,流动相为乙腈:50mM KH2PO4(30:70),流速为0.8mL/min的情况下,建立恩拉霉素HPLC标准曲线。恩拉霉素浓度在0.26-275.72U/mL范围内,得到的回归方程Y=1.83099E-6X-0.52846,相关系数r为0.99947。采用同种样品,对两种测定方法进行比较,所得结果重复性好,准确性高,都可用于含恩拉霉素的样品测定。对出发菌株(Streptomyces fungicidious KS010)进行NTG诱变、通过琼脂块法进行初筛,获得M-19菌株,产量较出发菌株提高32.62%。接着以该菌株为研究对象,比较了紫外复合诱变和60Co-Y复合诱变的效果,结果表明60Co-γ复合诱变优于紫外复合诱变。从60Co-γ复合诱变正变株中获得一株摇瓶效价达1853U/mL,较出发菌株提高68.00%的菌株。通过继代培养,该菌株稳定性好,命名为Streptomyces fungicidious Co250-42。通过单因素试验和中心组合响应面优化分析考察了影响Streptomyces fungicidious KS010菌株产恩拉霉素的因素,得到液态发酵产恩拉霉素的最佳条件。结果表明,当酵母浸出粉1.29%、磷酸二氢钾浓度10.84mmol/L、氯化锌浓度8.74mmol/L和葡萄糖5.93%时,初始pH8.0,33℃,发酵7天,其恩拉霉素效价为2065.82U/mL,较出发菌株效价(1041U/mL)提高了98.30%。以诱变菌株Streptomyces fungicidious Co250-42为研究对象,分别进行了摇瓶发酵条件的验证和上罐实验。实验结果表明该菌株在5L罐中发酵,在溶氧为20%的条件下,发酵11天后得到的恩拉霉素效价最高为2476.48U/mL。