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目的:
探讨铁锈颗粒诱导视网膜色素上皮细胞向巨噬细胞转分化的相关分子表达。
方法:
1.体外培养人视网膜色素上皮细胞D407细胞,取对数生长期细胞进行实验,铁锈颗粒分别作用12、24、48小时后,普鲁士蓝染色观察D407细胞吞噬铁锈颗粒情况;细胞克隆形成实验观察D407细胞吞噬铁锈颗粒后增殖能力的变化。
2.免疫组化观察人视网膜色素上皮细胞D407细胞吞噬铁锈后是否表达CD68;RT—PCR法检测铁锈作用D407细胞12、24、48小时后CD68、AMAC—1、VEGF、IL-1、TNF—α的mRNA的改变。
3.将铁锈颗粒植入至豚鼠视网膜神经上皮层与色素上皮层之间,于第7、14、21、28天取材,HE染色、普鲁士蓝染色、免疫组化染色观察视网膜色素上皮细胞吞噬铁锈颗粒及铁锈导致的组织病理改变。
结果:
1.铁锈作用人视网膜色素上皮细胞D407细胞12、24、48小时后,均可观察到D407细胞吞噬铁锈颗粒,铁锈颗粒位于胞浆,围绕胞核排列,细胞形态由长梭形变成短梭形或椭圆形。
2.细胞克隆形成实验显示人视网膜色素上皮细胞D407细胞能克隆化生长,克隆率为74.7%,其吞噬铁锈后细胞增殖能力降低,克隆率较正常细胞组低,铁锈作用12、24、48小时后克隆率分别为51.1%、34.0%、25.7%。
3.免疫组化表明吞噬铁锈颗粒的视网膜色素上皮细胞由表达CD68阴性转为弱阳性;RT-PCR结果显示铁锈颗粒可激活人视网膜色素上皮细胞D407细胞,其CD68、AMAC-1和VEGF mRNA表达水平增高,出现选择性激活巨噬细胞样特性,同时IL-1、TNF-α mRNA表达水平也增高,表现为经典激活巨噬细胞样特性。
4.铁锈植入豚鼠视网膜神经上皮层与色素上皮层之间,组织病理学发现视网膜色素上皮细胞能吞噬铁锈颗粒。细胞吞噬铁锈颗粒后,细胞由CD68表达阴性转为阳性,细胞胞体变大,从视网膜色素上皮层迷走,逐渐向内界膜方向迁移,部分达到玻璃体腔内。
结论:
1.体外培养的人视网膜色素上皮细胞仍具有较强的吞噬功能。
2.铁锈颗粒能诱导人视网膜色素上皮细胞向巨噬细胞样细胞转分化,表现为选择性激活和经典激活两种激活状态巨噬细胞样细胞。
3.动物体内视网膜色素上皮细胞同样可吞噬铁锈颗粒,并向视网膜内迷走,同时细胞表型呈现巨噬细胞样改变。