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第一部分 钙离子敏感受体基因多态性与肾结石发生风险的相关性研究目的:通过研究钙离子敏感受体(calcium-sensing receptor,CASR)基因多态性Arg990Gly(rs1042636,A>G)和Ala986Ser(rs1801725,G>T)与肾结石发生风险之间的关系,评价CASR基因多态性Arg990Gly(rs1042636,A>G)和Ala986Ser(rs1801725,G>T)能否成为预测肾结石易感性的基因标志物。材料与方法:本文采用病例-对照研究的方法,将2010年3月至2015年1月在苏州大学附属常熟医院及淮阴医院就医的615名确诊的肾结石患者纳入研究,所有结石患者均经超声及X线、CT检查确诊。对照组包含315名健康人,随机选自在苏州大学附属常熟医院定期常规体检的健康人群。所有研究对象均为中国汉族人。使用QIAamp DNA试剂盒提取研究对象血液标本中的基因组DNA。对CASR多态性位点Arg990Gly(rs1042636,A>G)和Ala986Ser(rs1801725,G>T)的基因分型采用基因测序法(SNaPshot)。病例组结石由患者自行排出或通过手术方式取出。运用结石红外光谱自动分析系统测定结石成分。肾结石患者的生化指标如血清钙、血清肌酐、血清尿酸运用临床自动生化分析仪测定。运用SAS统计软件(9.1.3版)进行统计分析。运用卡方检验或Fisher精确概率法对分类变量进行统计,t-检验对连续变量进行统计。CASR基因多态性位点Arg990Gly(rs1042636,A>G)和Ala986Ser(rs1801725,G>T)各基因型与肾结石发生风险之间的关系运用优势比(odds ratios,ORs)与95%可信区间(95%confidence intervals,CIs)来评估。运用单变量及多变量logistic回归分析来调节混杂因素(年龄、性别、吸烟、饮酒状态等)。结果:结石组和对照组的平均年龄分别为(48.0±12.0)岁和(47.6±11.4)岁,无统计学差异(P=0.606)。两组的年龄分布和性别构成也是相似的(P=0.259和 P=0.182)。然而,结石组中吸烟者比例(33.2%)显著高于对照组(26.0%),有统计学意义(P=0.026),提示吸烟可能在肾结石的发生过程中发挥某种作用。结石组中合并高血压病的患者的比例(27.6%)明显高于对照组(16.2%)(P<0.001)。在结石组中,Arg990Gly的AA、AG和GG基因型的占比依次为17.7%、56.6%、25.7%,对照组中依次为24.1%、54.6%、21.3%,具有统计学差异(P=0.047)。和CASR Arg990Gly野生型(AA型)携带者相比,CASR Arg990Gly突变型(GG型)携带者发生肾结石的危险性明显升高(调整后OR=1.64,95%CI=1.08-2.50)。在显性遗传基因模型中,携带有突变等位基因G的基因型者(AG/GG)发生肾结石的危险性明显升高(调整后OR=1.45,95%CI=1.04-2.03)。在分层分析中,这种危险性在年龄>48岁、不吸烟者、合并高血压和草酸钙结石的患者中更为明显(调整后OR=1.78,95%CI=1.02-3.09;调整后 OR=1.54,95%CI=1.03-2.30;调整后 OR=2.83,95%CI=1.32-6.07;调整后 OR=1.60,95%CI=1.12-2.28)。然而,Ala986Ser 的基因型分布在病例对照中分布并无统计学差异(P=1.000)。关于CASR Arg990Gly基因多态性与临床生化指标之间的关系,结果显示CASR Arg990Gly不同基因型患者的血清钙离子、血清肌酐、血清尿酸、尿液pH值水平无明显统计学差异(所有P>0.05)。在亚组分析中,CASR Arg990Gly不同基因型患者的高钙血症、高肌酐血症、高尿酸血症中的分布亦无显著的统计学差异(所有P>0.05)。结论:CASR Arg990Gly基因多态性与肾结石发生风险存在相关性,特别是在以下亚组中:年龄>48岁、不吸烟者、合并高血压和草酸钙结石患者。CASR Arg990Gly基因多态性可作为预测肾结石易感性的一个基因标志物。第二部分 血脂异常与肾结石发生风险的相关性研究目的:通过探讨肾结石患者与健康对照中血脂水平及血脂异常分布的差异,从而评估血脂异常与肾结石发生风险的相关性。材料与方法:本文采用病例-对照研究的方法,纳入2012年1月至2018年4月在苏州大学附属常熟医院就医的540例肾结石病例及656例健康人群,研究对象均为中国汉族人,签署知情同意书。所有结石患者均经超声及X线、CT检查确诊。合并有肿瘤、甲状腺或甲状旁腺疾病、降脂药物服用史的肾结石患者从本研究中剔除。抽取所有研究对象的空腹状态下静脉血来进行血脂测定。运用临床自动生化分析仪测定血液标本中的血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三脂(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。病例组结石由患者尿液中自行排出或通过手术方式取出。运用结石红外光谱自动分析系统测定结石化学成分。运用SAS统计软件(9.1.3版)进行统计分析。对分类变量采用卡方检验或Fisher精确概率法,对连续变量运用t-检验。血脂异常与肾结石危险性之间的关联分析通过计算优势比(odds ratios,ORs)与95%可信区间(95%confidence intervals,CIs)来评估,运用多变量logistic回归分析调节混杂因素。结果:结石组的平均年龄为(55.70±14.00)岁,对照为(54.32±17.77)岁(P=0.134)。两组间的年龄分布和性别构成相似(P=0.156和P=0.628)。结石组的BMI指数为(24.30±2.08),明显高于对照组(23.77±2.34)(P<0.001)。结石组合并高血压病者的比例(34.07%)明显高于对照组(23.93%)(P<0.001)。结石组血清甘油三脂水平(132.83±97.67 mg/dL)明显高于对照组(115.47±55.82 mg/dL)(P<0.001),而血清胆固醇(175.81±36.26 mg/dL)、高密度脂蛋白胆固醇(43.68±13.82 mg/dL)、低密度脂蛋白胆固醇(94.48±26.75 mg/dL)则明显低于对照组(上述变量分别为:182.72±34.01 mg/dL、54.16±11.76 mg/dL、102.91±24.80 mg/dL;所有P<0.001)。根据结石初发或复发进行分层分析,结果显示结石初发者或结石复发者的血清甘油三脂水平明显高于对照组,而高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇明显低于对照组。结石初发者的血清胆固醇水平明显低于对照组。在根据结石成分的分层分析中,结果显示除尿酸结石的其它结石成分者血清胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平均显著低于对照组。草酸钙结石及尿酸结石者的血清甘油三脂水平明显高于对照组。进一步分析血脂异常状态与肾结石发生风险关系,结果显示高甘油三酯血症者和低高密度脂蛋白胆固醇血症者发生肾结石风险明显升高(调整后OR=1.31,95%CI=1.01-1.71;调整后OR=7.57,95%CI=5.64-10.17)。相反,高胆固醇血症和高低密度脂蛋白胆固醇血症者发生肾结石的风险明显降低(调整后OR=0.60,95%CI=0.46-0.79;调整后OR=0.61,95%CI=0.42-0.90)。根据结石成分进行分层分析,结果显示高胆固醇血症可降低草酸钙结石及感染性结石的发生风险。高甘油三酯血症能够增加草酸钙结石的发生风险而高低密度脂蛋白胆固醇血症能够降低草酸钙结石的发生风险。低高密度脂蛋白胆固醇血症能够增加任何成分的结石的发生风险。结论:血脂异常包括高甘油三酯血症、低高密度脂蛋白胆固醇血症、高胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症均与肾结石发生风险存在相关性,且上述关系主要存在于草酸钙结石患者中。将来需要包含更大样本量的前瞻性研究来证实我们的结论。