论文部分内容阅读
土曲霉(Aspergillus terreus)是洛伐他汀(lovastatin)的主要产生菌,但一般其亲本菌株产洛伐他汀能力较低,极大地制约了洛伐他汀的工业生产。本文有鉴于此,通过紫外诱变处理,并基于粗糙脉孢酶(Neurospora crassa)对洛伐他汀的生物敏感性,对诱变菌株进行了初筛;同时,采用摇瓶培养,结合TLC和HPLC的分析方法,复筛出一株高产菌株;对复筛过程两种分析方法分别进行了初步探讨,比较其优劣,确定TLC法经溴酚兰显色剂显色处理为较佳方式;从而,建立了一套简单、实用、快速、经济且有效的洛伐他汀生产菌诱变筛选方法。 通过摇瓶培养,对发酵培养基组成进行了初步优化,确定了最佳碳、氮源及最佳碳氮比。甘油为最佳碳源,酵母膏和黄豆粉为最佳有机氮源,NH4H2PO4则为最佳无机氮源。在碳源初始浓度较低时,采用低的碳氮比,有利于发酵产物洛伐他汀生成;而碳源浓度较高时,提高碳氮比,可增加产物产量。在优选条件碳源浓度为50g/L、碳氮比为2.5的条件下,得到发酵终了时洛伐他汀产量为448mg/L浓度。 研究了摇瓶培养条件下装液量、接种量等对菌丝球形成及洛伐他汀产量的影响。实验确定,接种孢子浓度增大,生成的土曲霉菌丝球数量多、直径小、分布均匀,产洛伐他汀能力大;孢子浓度在2×107以上,效果较佳;而装液量则不宜太大,500 mL摇瓶装液量取15~20%较为适宜,证明,通气对产物合成的重要性。 以2L通气搅拌发酵罐中分批培养结果为基础,对土曲霉产洛伐他汀过程菌体生长和产物生成动力学进行了研究,初步建立了土曲霉生产洛伐他汀的分批发酵动力学模型,并对模型参数进行了估计,发酵动力学模型较好地预示实验结果。