锁阳化学成分类型检识、四类化合物提取工艺及生物活性研究

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本研究检识了锁阳中所含化学成分类型,优化得到了锁阳中四类化合物的超声波辅助提取工艺,并对四类化合物的含量测定进行了方法学考察。在此基础上比较研究了不同来源锁阳样品中四类化合物的含量,以及对这四类化合物的抗氧化和体外抗肿瘤活性进行了检测。首先本文从锁阳化学成分类型的角度,以经典的化学成分定性检识方法,系统地研究了锁阳中所含有的化学成分类型。研究结果显示在检识实验所涉及到的13大类化合物中,只有强心苷类没有检识到。在明确了锁阳各化学成分类型的基础上,以各类化合物的提取率作为评价指标,通过单因素实验、采用响应面分析法或正交实验法系统地筛选研究了锁阳中多糖、黄酮、皂苷及鞣质类成分的超声波辅助提取工艺,分别得到了四类化合物的最佳超声提取工艺:(1)锁阳黄酮提取工艺:乙醇浓度70%、液料比1:30、超声功率为600W、提取温度77℃、超声提取时间62min、提取2次。(2)锁阳皂苷提取工艺:乙醇浓度65%、超声功率为420W、料液比为1:15、超声提取时间45min、提取温度为90℃、提取2次。(3)锁阳鞣质提取工艺:乙醇浓度80%、超声功率为600W,料液比为1:65,超声提取时间75min、提取2次。(4)锁阳多糖提取工艺:锁阳粉末先后以6倍体积石油醚和80%乙醇处理2次/2h,药渣挥干溶剂后再以蒸馏水为提取溶剂,超声功率420W、料液比1:35、提取温度80℃、超声提取60min、提取2次。不同来源的锁阳样品中四类化合物含量比较研究结果表明:瓜州锁阳样品中多糖、黄酮、皂苷、鞣质含量均高于新疆、内蒙样品,从化学成分含量角度验证了瓜州锁阳质量优于新疆和内蒙出产的锁阳。瓜州三九锁阳中除多糖含量高于4、5月份样品外,黄酮、皂苷、鞣质含量均低于4、5月份样品。因此,锁阳多糖含量能否作为锁阳质量评价的内在指标,仍需如药效学等其他方面的证据。同一产地,不同年限的锁阳样品中各类化合物含量均有不同程度的差别,说明不同生产年限的锁阳样品,质量受当年气候条件、采收、加工等多种因素的影响,提示锁阳作为药材及多种用途的产品,制定其内在质量控制标准是非常必要和迫切的。最后,对锁阳四类化合物进行了生物活性研究。抗氧化实验结果表明,锁阳鞣质、黄酮和皂苷都表现出较强的还原力和对DPPH·的清除能力;而锁阳四类化合物对羟基自由基的清除能力则相对较弱。体外抗肿瘤活性研究结果表明,锁阳四类化合物对人肺腺癌细胞A549有不同程度的抑制作用,其强弱顺序为:锁阳黄酮>锁阳鞣质>锁阳皂苷>锁阳多糖。而这四类化合物对人肝癌细胞SMMC-7721均没有表现出明显的抑制作用。本研究结果将为锁阳进一步的化学成分研究、生物活性研究、相关产品的开发以及锁阳资源的高效利用、锁阳产品质量标准的制定等方面提供科学依据。
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