【摘 要】
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由于人类平均寿命增长，疾病种类增加，新药的研发变得十分迫切，但新化合物的严重匮乏制约了微生物药物的发展。链霉菌是微生物药物主要生产菌(>55%)，富含隐性基因簇，是天然活性产物的宝库，如何系统挖掘链霉菌的隐性基因簇，是微生物药物研发的热点。 恰塔努加链霉菌L10中存在30多个的编码次级代谢产物的隐性基因簇，为了进一步研究这些基因簇编码的代谢产物，本课题利用核糖体技术，针对L10中RpsL(核糖体
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由于人类平均寿命增长，疾病种类增加，新药的研发变得十分迫切，但新化合物的严重匮乏制约了微生物药物的发展。链霉菌是微生物药物主要生产菌(>55%)，富含隐性基因簇，是天然活性产物的宝库，如何系统挖掘链霉菌的隐性基因簇，是微生物药物研发的热点。
恰塔努加链霉菌L10中存在30多个的编码次级代谢产物的隐性基因簇，为了进一步研究这些基因簇编码的代谢产物，本课题利用核糖体技术，针对L10中RpsL(核糖体S12蛋白)、RpoB(RNA聚合酶β亚基)的高度保守区域定点突变。结果表明，ZJYU1(L10/RpoB(H437Y))的培养液颜色不同于野生型菌株培养液，在高效液相色谱图上找到对应物质的洗脱峰，随后分离鉴定得到一个角蒽酮类的新化合物(anthrachamycin)。
同时，采用荧光定量PCR(qRT-PCR)及凝胶阻滞电泳实验(EMSA)探索核糖体技术的激活隐性基因簇机制。qRT-PCR结果显示，ZJYU1中全局性调控基因relC、relA、adpA的转录水平高于野生型菌株。EMSA结果显示全局性调控因子AdpA能与anthrachamycin合成基因簇的调控基因chaI的启动子结合。结合相关文献报道，初步探讨了核糖体技术激活anthrachamycin合成基因簇的机制：RNA聚合酶β亚基的高度保守区域氨基酸种类改变，可能影响RNA聚合酶的结构、不同基因的转录水平，最终激活anthrachamycin的生物合成。
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