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目的:观察分化诱导剂三氧化二砷(As2O3)和全反式维甲酸(ATRA)对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响;探讨As2O3和ATRA对人宫颈癌Hela细胞生长影响的机制及作用机制是否与分化相关基因NDRG1相关;为分化诱导剂应用于宫颈癌的临床治疗提供实验依据和理论基础。
方法:采用MTT比色法检测Hela细胞生长情况:用不同浓度的As2O3和ATRA处理人宫颈癌Hela细胞,培养48 h和72 h,计算药物对细胞生长的抑制率。细胞生长抑制率=(1-实验组A490值)/对照组A490值×100%。每组实验重复三次,计算平均值。并以药物浓度做横坐标,细胞生长抑制率为纵坐标作图。
半定量RT-PCR从分子水平检测As2O3和ATRA对宫颈癌Hela细胞中NDRG1基因表达的影响:分别提取未加药处理的Hela细胞和各组加药处理后的Hela细胞中的RNA,经RNA含量测定后,分别逆转录得到各cDNA,进行PCR反应,以NDRG1/β-actin作为NDRG1基因表达的相对强度,检测As2O3和ATRA对宫颈癌Hela细胞中NDRG1基因表达的影响。
Western-blot从蛋白水平检测As2O3和ATRA对宫颈癌Hela细胞中NDRG1基因表达的影响:分组方法同RT-PCR,将提取的各组总蛋白进行SDS-PAGE分离,再转移至NC膜上,染色后,洗膜、封闭,加入抗体,洗膜后压干,显影及定影。以NDRG1/β-actin作为NDRG1蛋白表达的相对强度,检测NDRG1基因表达的变化情况。
结果: As2O3和ATRA能够抑制宫颈癌Hela细胞生长,并且这种抑制作用呈浓度和时间的依赖性;As2O3能够从分子水平和蛋白水平使宫颈癌Hela细胞中NDRG1基因的表达上调;ATRA能够从分子水平和蛋白水平使宫颈癌Hela细胞中NDRG1基因的表达上调。
结论:分化诱导剂AS2O3和ATRA能够抑制Hela细胞生长,对Hela细胞有分化诱导作用,且这种作用机制可能与NDRG1基因相关。