前言胰腺癌是一种常见的消化道恶性肿瘤。据世界卫生组织统计,世界上每年胰腺癌新发病例约为21.6万人,占全部恶性肿瘤的2%,胰腺癌的死亡率非常高,与发病率接近,在癌症死因中占第4位。胰腺癌的治疗非常棘手。目前首选的治疗方式为手术切除,但由于胰腺癌起病隐秘,早期即发生转移,80%的病人在初次确诊时已属晚期,手术切除的机会只有15～20%甚至更低,并且术后仍有复发转移。近年来,胰腺癌的药物治疗已经有了显著的进步,化疗已成为必不可少的治疗手段之一,吉西他滨是胰腺癌化疗的首选药物,吉西他滨联合化疗与其单独用药相比,能够提高总生存期,客观缓解率和无进展生存期等,但患者的5年生存率仍较低。间皮素(mesothelin, MSLN)是一种分化抗原,表达于正常的间皮组织中,但最新的研究发现间皮素在多种癌症中特异性的高表达,包括间皮瘤,胰腺癌,约70%的卵巢癌和50%的肺癌。Argani P及其同事首次在胰腺导管癌中发现间皮素的表达,利用基因表达系列分析(SAGE)技术,他们发现在胰腺癌基因库中间皮素的标记有连续性的表达,但是在正常的胰腺组织中却无表达,并且在4例早期切除的胰腺癌组织中均检测到间皮素mRNA的表达；同时利用免疫组化的方法,在全部的60例早期切除的胰腺癌样本中均检测到间皮素。Hassan R及其同事随后的研究也证实了这一发现,他们在18例胰腺腺癌组织中均检测到间皮素的表达,但是在正常的胰腺组织和慢性胰腺炎中则未检测出其表达。Ordanez NG同样证实了在大多数的胰腺腺癌组织中有间皮素的表达而在胰岛的肿瘤细胞中无表达,并且在胆道系统的其他腺癌中,胰腺间皮素也有很高的表达,例如胆囊癌和胆管癌。虽然间皮素的生物学功能仍在进一步的探索中,但是目前主要倾向于研究间皮素在肿瘤生物学中所发挥的作用。近期的研究结果提示,间皮素结合MUC16/CA-125可影响卵巢癌细胞的转移,并且少量间皮素可释放入血液,因此在间皮瘤和卵巢癌患者血清中可以检测到间皮素水平的升高,此结果提示,血清间皮素的检测可作为卵巢癌诊断及追踪治疗的重要依据。根据Li M等的研究发现,间皮素的表达促进胰腺癌细胞的增殖与迁移,相应的裸鼠模型试验也表明,间皮素的过表达组的肿瘤体积较对照组增大4倍。本试验重点研究间皮素对胰腺癌化疗药物的影响,通过小RNA干扰技术沉默间皮素蛋白的表达后,观察化疗药物的作用。材料和方法间皮素siRNA和荧光标记的siRNA分别通过脂质体瞬时转染入PANC-1细胞,流式细胞仪和倒置相差荧光显微镜分别检测转染效率,Western blot检测间皮素基因沉默的效果。以胰腺癌化疗药物吉西他滨、顺铂、阿霉素和葫芦素E的不同浓度分别处理间皮素基因沉默后的PANC-1细胞,继续培养48h后,MTT法检测细胞增殖情况。试验结果以SPSS 16.0统计学软件进行统计学分析。实验结果1、流式细胞仪检测结果显示具有荧光标记的PANC-1细胞占总数的77.4%,证明大部分细胞转染成功。2、荧光倒置相差显微镜观察结果显示同一视野下,绿色荧光细胞数占可见光下总细胞数的80%左右。3、Western blot检测结果显示间皮素基因沉默后,间皮素蛋白基本无表达。4、MTT法检测间皮素基因沉默抑制胰腺癌细胞增殖结果显示,间皮素基因沉默后,细胞增殖明显减少(P<0.05)。5、吉西他滨单独使用即具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用,其作用效果随浓度的增加而逐渐加强,当其作用于间皮素基因沉默后的胰腺癌细胞时,增殖抑制率在吉西他滨0.1μM时即可达到60.47%±4.234(P<0.01)6、顺铂单独使用即具有可抑制胰腺癌细胞增殖的作用,其作用效果随浓度的增加而逐渐加强,当其作用于间皮素基因沉默后的胰腺癌细胞时,增殖抑制率在顺铂1μM时即可达到59.82%±2.362(P<0.01)。7、阿霉素单独使用即具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用,其作用效果随浓度的增加而逐渐加强,当其作用于间皮素基因沉默后的胰腺癌细胞时,增殖抑制率在阿霉素1μM时即可达到80.32%±1.868(P<0.01)8、葫芦素E单独使用即具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用,其作用效果随浓度的增加而逐渐加强,当其作用于间皮素基因沉默后的胰腺癌细胞时,增殖抑制率在葫芦素E 1μM时即可达到38.82%±4.299(P<0.01)。结论1、间皮素基因沉默后,胰腺癌细胞的增殖受到抑制。2、间皮素基因沉默后,化疗药物对胰腺癌细胞的增殖抑制作用增强。