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目的构建出携带小干扰RNA(siRNA)和RNA适配体(aptamer)的包装RNA (packaging RNA, pRNA)纳米基因载体,研究其对哮喘小鼠脾淋巴细胞STAT5b基因的沉默作用。方法使用PCR和体外转录的方法构建靶向沉默STAT5b基因的pRNA/siRNA单体、靶向结合CD4分子的pRNA/aptamer(8)单体及pRNA/aptamer(14)单体,进而构建出pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(8)二聚体和pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(14)二聚体。用卵清蛋白(OVA)致敏、激发的方法建立哮喘小鼠模型,用淋巴细胞分离液分离出脾淋巴细胞,再用已构建的pRNA单体、pRNA二聚体进行淋巴细胞体外干预,RT-PCR法检测在有／无转染试剂条件下pRNA单体和pRNA二聚体的干预效果,CCK—8法检测pRNA/siRNA单体和pRNA/aptamer(8)单体的毒性作用。结果(1)临床表现、肺组织病理检查和肺泡灌洗液白细胞总数计数结果显示,哮喘小鼠模型制备成功。(2)测序及二级结构预测结果显示,pRNA/siRNA、pRNA/aptamer(8)和pRNA/aptamer(14)单体构建成功,但本实验所用非变性PAGE凝胶电泳未能鉴定出pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(8)二聚体和pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(14)二聚体。(3)RT-PCR结果显示,pRNA/siRNA单体及pRNA/aptamer(8)单体体外干预淋巴细胞后,细胞内STAT5b基因的mRNA表达无明显变化；而pRNA/aptamer(14)单体、pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(8)二聚体及pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(14)二聚体体外干预淋巴细胞后,细胞内STAT5b基因的mRNA表达明显减少。(4)CCK—8结果显示pRNA/siRNA和pRNA/aptamer(8)对淋巴细胞无明显毒性。结论1使用PCR和体外转录的方法能成功构建和获得符合需求的pRNA单体。2 pRNA/siRNA单体直接干预淋巴细胞,对靶基因STAT5b的mRNA表达无明显影响。3 pRNA/aptamer(8)单体及pRNA/aptamer(14)单体可有效发挥aptamer的配体功能。4 pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(8)二聚体和pRNA/siRNA-pRNA/aptamer(14)二聚体能在血清环境中稳定存在,有效沉默哮喘小鼠脾淋巴细胞内靶基因STAT5b的mRNA表达,其机制可能是发挥了靶向沉默CD4+T淋巴细胞内STAT5b基因mRNA表达的预期功能。5 pRNA纳米基因载体值得进一步研究,有望用于哮喘的基因治疗。