热休克蛋白(heat shock proteins，HSP)，一种应激诱导而产生的分子伴侣，有一个80-100氨基酸残基组成α-晶体蛋白结构域，分子量大约在12-43kD。据分子量大小和功能一般分为三个家族：HSP70、HSP90和小分子热休克蛋白家族。小分子热休克蛋白(small heat shock proteins，sHSP)是一种非常多样性的家族，不同种属的生物体有不同的种类，分子量在15-30kD。　　 筛选本实验室家蚕蛹期cDNA文库，发现一条已知的家蚕小热休克蛋白的基因Bmhsp21.4。其包含一个564bp的开放阅读框，编码一个由187个氨基酸残基组成的蛋白，预测分子量为21.4kD，等电点为5.958。我们将其插入到pET-28a(+)载体，成功构建重组质粒pET-28a(+)-Bmhsp21.4，并转化感受态细胞BL21(DE3)，经IPTG诱导Bmhsp21.4表达，超声破碎细胞后用SDS-PAGE分析，发现在30kD左右的位置有一条特异性蛋白条带。SDS-PAGE结果显示该蛋白部分以可溶形式存在，经层析纯化后和质谱分析，得到该重组蛋白的分子量为24.862kD，证实了该蛋白表达的正确性。用纯化的蛋白免疫雄性新西兰大白兔，获得多克隆抗血清，效价达1:6400以上。应用Western blotting及RT-PCR分析家蚕五龄幼虫的脂肪、精巢、卵巢、皮、气管、马氏管、丝腺、中肠和头部等组织及卵、幼虫、蛹和蛾四个时期中BmHSP21.4的分布，我们在很多组织中检测到了明显的信号，而在头部、皮及精巢的信号很弱。热激试验中，以温度为梯度，研究五龄幼虫中丝腺、马氏管及头部三个组织中BmHSP21.4蛋白在正常和受激后的表达变化情况，当热激温度达到40℃-45℃时BmHSP21.4表达量最大。以热激时间为梯度，同样对五龄幼虫丝腺、马氏管及头部三个组织进行热激，研究其在不同温度下BmHSP21.4蛋白量的变化情况，发现热激时间为2.5h-3h时BmHSP21.4表达量明显高于其它热激时间。最后利用家蚕卵巢细胞BmN研究BmHSP21.4在细胞中的间接免疫荧光实验，BmHSP21.4主要存在于在细胞核中，还有一部分存在胞质。