【摘 要】
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许多实体瘤细胞膜表面存在异常大量的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),受体水平与预后呈负相关性.EGF免疫融合蛋白是利用基因融合技术将编码毒
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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许多实体瘤细胞膜表面存在异常大量的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),受体水平与预后呈负相关性.EGF免疫融合蛋白是利用基因融合技术将编码毒素分子结合区的那段DNA删除,用人EGF的基因片段代替,构建成嵌合基因,利用表达载体表达而成,它主要对细胞膜表面EGF过表达的肿瘤细胞有特异性杀伤作用.利用基因工程技术,构建表达人血管生成素(Angiogenin,Ang)与志贺氏毒素A(45-247)和EGF的两种免疫融合蛋白工程菌,分别在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的25-40%.Ang=EGF与StxA<,45-247>-EGF在E.coli中均以 包涵体形式表达,经过变性、复性以及亲和层析纯化,得到纯度达95%以上的活性蛋白.通过抗肿瘤试验,结果显示,两种免疫融合蛋白对体外培养条件下的乳癌MDA、MCF-7,肺癌A549,肝癌HEPG2,人类上皮癌A431及口腔鳞状上皮癌KB等有明显的特异杀伤活性.对以KB构建EGF受体过表达的裸鼠动物模型,有明显的体内抑瘤作用,抑瘤效果与环磷酰胺相当.由于Ang为人源性;StxA经突变截短降低分子量,降低了免疫原怀,而毒性依存,所以两种免疫融合蛋白均可望具有良好的临床应用前景.
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