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目的根尖牙乳头干细胞(Stem cells from apical papilla,SCAPs)是位于正在发育恒牙根尖部牙乳头组织中的间充质干细胞,对于形成根髓和牙根部牙本质具有重要作用。信号通路和转录因子在调控根尖牙乳头干细胞增殖、分化中具有重要作用。有研究表明,环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)信号通路、核因子I-C(Nuclear factor I-C,NFIC)均能够促进SCAPs增殖及定向分化。本实验通过慢病毒转染过表达NFIC基因,研究转录因子NFIC在c AMP信号通路促进根尖牙乳头干细胞成牙/成骨分化中的作用,从而探讨转录因子NFIC、c AMP信号通路在调控SCAPs定向分化过程中可能的相互作用关系。方法收集牙根尚未发育完成的健康第三磨牙,采用酶消化法分离培养SCAPs。培养所得的细胞进行流式细胞术检测细胞表面特定抗原,茜素红染色及油红O染色鉴定细胞成骨、成脂分化潜能。过表达NFIC慢病毒转染SCAPs细胞后,Western blot检测慢病毒转染效率。将SCAPs分别于普通矿化诱导液(对照组)、c AMP信号通路激动剂(Forskolin组)、转染空病毒载体协同Forskolin(Forskolin+LV-empty组)、转染过表达NFIC慢病毒协同Forskolin(Forskolin+ov-NFIC组)的矿化诱导液中培养。矿化诱导10天后茜素红染色检测各组矿化结节形成情况,并进行氯化烷基十六吡啶(cetylpyridinium chloride,CPC)半定量分析。矿化诱导7天后,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,QPCR)检测RUNX2,ALP和OCN的m RNA表达情况。结果流式细胞术检测结果显示,SCAPs表达间充质干细胞相关表面标志物CD44,CD105和CD90,而造血干细胞特异性表面标记物CD45的表达较低。茜素红染色及油红O染色检测发现细胞具有较强的成骨、成脂分化潜能。过表达NFIC慢病毒转染SCAPs细胞后,荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光。Western blot检测慢病毒转染效率发现,转染过表达NFIC病毒的SCAPs细胞NFIC蛋白表达量高于空白对照组和阴性病毒对照组。实验各组细胞分别在成骨诱导液中矿化培养10天,进行茜素红染色后发现,各组均能形成矿化结节。与对照组相比,Forskolin作用SCAPs后矿化结节形成增多,染色加深;而Forskolin+ov-NFIC组较Forskolin组镜下可见更多更密集的钙化结节,红染也更深,说明同时过表达NFIC基因后增强了Forskolin对SCAPs矿化结节形成能力的促进作用。矿化结节定量分析结果与茜素红染色结果一致,差异具有统计学意义。QPCR检测相关矿化标记物表达情况,结果显示Forskolin作用SCAPs后,RUNX2,ALP和OCN的m RNA表达较对照组均有不同程度升高;而Forskolin+ov-NFIC组这些矿化基因的表达较Forskolin组进一步上调,说明ov-NFIC基因与Forskolin具有协同作用。上述结果表明,转录因子NFIC能够增强Forskolin对SCAPs分化的促进作用。结论酶消化法培养所得的SCAPs检测表面抗原表达情况证实为间充质来源干细胞,且具有多向分化潜能。转录因子NFIC促进c AMP信号通路对SCAPs分化的调控作用。