论文部分内容阅读
目的:本研究通过建立急性有机磷中毒(AOPP)大鼠模型,应用不同剂量阿托品与氯磷定对其进行治疗。通过观察大鼠临床表现、神经细胞形态变化及测定大鼠大脑乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性细胞面积比,探讨急性有机磷中毒神经损伤的机制,同时了解不同剂量阿托品与氯磷定对其所致神经系统损伤的影响,进一步指导临床治疗。方法:通过2LD50氧乐果灌胃染毒建立急性有机磷中毒模型,并将70只大鼠按随机分组原则分为7组,每组10只。A组(空白对照组):给实验组相同体积的生理盐水胃内灌注;其余6组同时胃内灌注2LD50(100mg/kg)的氧化乐果;B组(未治疗组):染毒后不进行任何治疗;C组(小剂量氯磷定+适量阿托品);D组(中等量氯磷定+适量阿托品);E组(突击量氯磷定+适量阿托品);F组(小剂量阿托品+中等量氯磷定);G组(大剂量阿托品+中等量氯磷定)。24h后将动物使用水合氯醛腹腔注射麻醉后活体取脑组织,分别切取大脑皮层、海马部位的脑组织,迅速将标本放入4%的多聚甲醛溶液中固定,做苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色形态学观察、电镜观察及乙酰胆碱酯酶(AChE)免疫组化染色观察。通过观察大鼠临床表现、神经细胞形态变化及测定大鼠脑内AChE阳性细胞面积比,间接了解神经损伤程度,通过统计学方法比较组间有无差异。结果:1中毒大鼠临床表现A组(空白对照组)大鼠未发生任何中毒表现;B组(未治疗组)大鼠在染毒约20min后即出现明显的中毒表现,包括毒蕈碱样表现(恶心、呕吐、多汗、流泪、流涎、瞳孔缩小和气促,其中有3只出现明显呼吸困难)、烟碱样表现(四肢发生肌纤维颤动)、中枢神经系统表现(共济失调,昏迷及抽搐);C组大鼠出现轻度肌纤维颤动、口干及共济失调,无毒蕈碱样表现;D组大鼠出现轻度共济失调;E组大鼠无中毒临床表现,仅有轻度口干;F组大鼠出现轻度恶心、呕吐、流涎、瞳孔缩小及精神萎靡不振;G组大鼠出现阿托品中毒表现,如瞳孔较前扩大、口干、皮肤粘膜干燥,同时极度烦躁、易激惹。2大鼠HE染色结果A组(空白对照组)大鼠未发生任何神经系统病变;B组(未治疗组)大鼠出现神经细胞明显水肿、变性及坏死;C组大鼠也出现神经细胞明显水肿,但无神经细胞坏死;D组、F组及G组大鼠发生轻度神经细胞水肿;E组大鼠神经细胞偶见水肿,无明显病变。3大鼠电镜表现皮层神经元:A组(空白对照组)大鼠未发生任何病变; E组大鼠表现为神经元基本正常;D组、F组及G组大鼠未发生神经元水肿,但表现为血管间隙增宽、线粒体肿胀;C组大鼠出现轻度神经元水肿,亦有血管间隙增宽、线粒体肿胀;B组(未治疗组)表现为神经元明显水肿,并伴有血管间隙增宽、线粒体肿胀。海马神经元:A组(空白对照组)大鼠未发生任何病变;E组大鼠表现为神经元基本正常,胶质细胞水肿;D组、F组及G组大鼠未发生神经元水肿,但表现为神经元固缩,电子密度增高,神经毡及胶质细胞水肿;C组大鼠出现轻度神经细胞及胶质水肿;B组(未治疗组)表现为神经元明显水肿,细胞器基本正常。4大鼠免疫组化染色结果AChE在A组(空白对照组)大鼠脑组织中有明显表达,而在B组(未治疗组)大鼠脑组织中表达很少,经图像分析后,与A组比较有统计学意义(P<0.05),中毒组较正常对照组AChE阳性细胞减少,有机磷对AChE有抑制作用。AChE在不同治疗组大鼠脑组织中有不同表达,经图像分析后,与A组及B组比较均有统计学意义(P<0.05),可以认为有机磷化合物对AChE具有抑制作用,治疗组对AChE具有复活作用; E组和C组及D组比较,有统计学意义(P<0.05),可以认为突击量氯磷定组较小剂量及中等剂量氯磷定组对AChE的复活作用更好;F组和G组与D组比较,无统计学意义(P>0.05),尚不能认为阿托品对AChE有影响。结论:急性有机磷中毒可导致大鼠大脑皮层、海马损伤;不同剂量氯磷定组对大鼠大脑皮层、海马AChE均具有复活作用,以突击量氯磷定组复活效果最好,中等量氯磷定组次之,小剂量氯磷定组最差,推测不同剂量氯磷定均具有减轻大鼠大脑皮层、海马损伤的作用,且以突击量氯磷定效果最好;不同剂量阿托品组大脑皮层、海马AChE阳性细胞面积比组间比较无意义,且大鼠大脑皮层、海马HE及电镜观察神经细胞形态无差别,尚不能认为阿托品对大脑皮层、海马AChE有影响,推测不同剂量阿托品对减轻大鼠大脑皮层、海马损伤无影响,但是否会通过缓解M样症状等机制减轻中枢神经损伤尚有待于进一步研究。