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目的:本项目通过建立中耳炎小鼠模型,探讨自噬与中耳炎发病机制的关系,可能为临床上治疗中耳炎提供理论依据,同时寻找治疗的靶点和研发中耳炎的新药,通过诱导自噬改善中耳炎。方法:前期中耳炎小鼠模型我们选用TLR2基因敲除(Tlr2-/-)小鼠通过鼓膜穿刺的方法向中耳腔注射60μg/10ul浓度的PGPS,成功地构建了类似人类中耳炎的模型,采用正常野生型(C57BL/6,C57)小鼠作为对照组同时诱导中耳炎,三天后进行后续实验。后期用药雷帕霉素(Rapamycin,RPM),这是一种自噬诱导剂,选取Tlr2--小鼠随机分为PGPS组,PGPS+RPM 0.35μM低剂量保护组,PGPS+RPM 0.7μM高剂量保护组。实验从听功能评估,包括ABR实验、鼓室计测量分析中耳炎小鼠的听力学改变。形态学实验检测中耳组织病理切片及自噬因子p62的原位表达。TUNEL染色法观察凋亡和自噬功能的关系。分子生物学实验采用western blot法检测中耳炎小鼠自噬相关因子及炎症因子的表达情况。结果:结果显示Tlr2-/-小鼠更易受PGPS的诱导,中耳腔呈现更严重的浸润现象,听力阈值损失明显,并且检测到中耳炎小鼠模型中相关炎症因子表达量升高,自噬起始信号蛋白LC3升高,自噬底物p62蛋白水平也升高且中耳腔表皮细胞出现凋亡,这表明自噬降解功能损伤,自噬底物存在大量堆积,我们猜测中耳上皮细胞的自噬功能损伤有可能参与耳炎产生的机制。后期用药雷帕霉素,验证RPM通过修复自噬降解功能来治疗中耳炎。结果显示雷帕霉素的治疗明显缓解了炎症的发生,听力阈值降低,中耳腔脓液变少,降低了炎症因子TNF-α的表达,p62因子蛋白表达量下降,中耳腔表皮凋亡程度减轻。RPM修复了自噬降解功能并且减轻凋亡有改善中耳炎的作用。结论:中耳上皮细胞的自噬降解功能损伤参与Tlr2-/-小鼠中耳炎产生的机制,我们认为雷帕霉素可以诱导或修复中耳上皮细胞的自噬降解功能,从而阻断炎症,降低凋亡,最终能够治疗中耳炎,提高小鼠的耳功能。修复自噬降解功能是治疗中耳炎的新途径,为临床治疗中耳炎开辟了新靶点。