肝癌是世界范围内的恶性肿瘤,发病率逐年上升,预后极差且尚无有效治疗药物。现代临床和药理研究表明,淫羊藿具有良好的抗肝癌活性,其所含的黄酮类成分可以通过抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞免疫逃逸等多种作用机制发挥抗肝癌作用。然而现有文献报道多集中于淫羊藿中少数几个单一成分的抗肝癌作用及机制,未能体现中药多成分、多靶点、多途径整体调节的特点,对于其抗肝癌的药效物质基础和作用机制还缺乏系统研究。针对上述问题,本研究采用细胞和动物模型对淫羊藿提取物（主要为黄酮类成分）的抗肝癌活性进行评价,并利用谱-效分析、血清药物化学、代谢组学及网络药理学等多种手段从淫羊藿整体作用的角度对其抗肝癌药效物质基础和作用机制进行考察,以促进淫羊藿在临床肝癌治疗中的应用及相关制剂的研发。本课题的研究内容如下:1淫羊藿提取物体内外抗肝癌活性评价以人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721为模型,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法,以细胞存活率为考察指标,对淫羊藿提取物的体外抗肝癌活性进行评价。结果表明,淫羊藿提取物可以抑制肝癌细胞活性,抑制肝癌细胞增殖,且具有明显的浓度依赖性。当淫羊藿提取物的给药浓度为100（生药）μg·mL-1时具有明显的抑制作用。以H22细胞荷瘤小鼠为肝癌模型,通过肿瘤生长情况（瘤体积、瘤重）及相关细胞因子（IL-6、TNF-α、IFN-γ）评价了淫羊藿的体内抗肝癌作用。结果表明,淫羊藿提取物能显著延缓荷瘤小鼠肿瘤生长,并一定程度上延长肝癌小鼠的生存期,表现出良好的体内抗肝癌疗效。此外,以血常规指标、肝脾指数、主要脏器苏木素-伊红（HE）染色结果对淫羊藿提取物的安全性进行考察,结果表明,给药期间淫羊藿提取物具有较好的安全性。2淫羊藿提取物抗肝癌药效物质基础研究首先,以HepG2和SMMC-7721肝癌细胞为体外模型,通过MTT实验测定100μg·mL-1浓度下20批次淫羊藿提取物对肝癌细胞的抑制率。以抑制率为因变量Y,以淫羊藿提取物指纹峰峰面积为自变量X,建立偏最小二乘（PLS）分析模型,筛选淫羊藿提取物中抗肝癌活性成分。结果表明,淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、朝藿定C、2"-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、朝藿定B、箭藿苷B与淫羊藿对肝癌细胞的抑制率显著相关,为淫羊藿提取物抗肝癌的活性成分。然后,利用二乙基亚硝胺（DEN）构建原发性肝癌大鼠模型,基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术,明确淫羊藿提取物在正常及肝癌模型大鼠体内入血成分进行分析。在正常和肝癌大鼠血浆中共鉴定59个化学成分,其中原型成分25个,代谢物44个,且上述6个成分在正常及肝癌大鼠血浆中均有分布。综合分析体外谱效分析结果及入血成分鉴定结果表明,淫羊藿提取物抗肝癌的主要药效物质基础为淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、朝藿定C、2"-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、朝藿定B、箭藿苷B 6种成分。3基于网络药理学的淫羊藿提取物抗肝癌机制预测研究以上述分析得到的6种淫羊藿提取物抗肝癌主要药效物质（淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、朝藿定C、2"-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、朝藿定B、箭藿苷B）为研究对象,通过网络药理学手段对淫羊藿提取物抗肝癌的作用机制进行预测。结果表明,淫羊藿提取物可干预PI3K/AKT、VEGF、mTOR等多条信号通路共同发挥抗肝癌作用,其作用的关键靶点为前列腺素G/H合成酶2（PTGS2）、肿瘤坏死因子（TNF）、内皮源性一氧化氮合酶（NOS3）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARG）、热休克蛋白HSP90-α（HSP90AA1）、雌激素受体1（ESR1）、蛋白激酶C-α型（PRKCA）和血管内皮生长因子受体2（KDR）。通过分子对接实验对上述6种药效活性成分与8个关键靶点的对接活性进行验证,结果表明,各成分与核心靶点均具有较强的亲和能力。通过蛋白免疫印迹法（Western blot）考察淫羊藿提取物处理后肝癌细胞中PI3K/AKT通路相关蛋白的表达,结果表明,淫羊藿提取物可通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活发挥作用,与网络药理学预测结果一致。4基于代谢组学技术的淫羊藿提取物抗肝癌机制研究采用基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS的代谢组学技术,结合主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）等方法,筛选并鉴定血浆和尿液中与肝癌相关的生物标志物,分析淫羊藿提取物抗肝癌的代谢调控机制。结果表明,DEN诱导的原位肝癌大鼠血浆和尿液代谢轮廓发生明显变化,并鉴定出23种肝癌相关的生物标志物。淫羊藿提取物可以回调肝癌23种肝癌生物标志物的异常水平,其中lysoPC（16:0/0:0）、胆酸、视黄醇酯、6-hydroxymelatonin、亚麻酸、花生四烯酸6种代谢物有显著回调,通路涉及亚麻酸代谢、视黄醇代谢和花生四烯酸代谢。本文在体内外对淫羊藿提取物的抗肝癌活性进行了评价,并在此基础上初步明确了淫羊藿提取物抗肝癌的药效物质基础和作用机制。淫羊藿在体内外均具有良好的抗肝癌效果,谱-效分析及正常和肝癌大鼠的入血成分分析结果说明其主要药效物质基础为淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、朝藿定C等6种黄酮类成分。网络药理学及代谢组学分析表明其药效的发挥与PI3K/AKT信号通路,VEGF信号通路、mTOR信号通路以及亚麻酸代谢,视黄醇代谢和花生四烯酸代谢等代谢通路有关。本研究为淫羊藿的临床应用和合理开发提供了实验基础和科学依据,同时为中药物质基础研究方法提供了研究思路参考。