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应激是动物合群、转移和运输过程中不可避免的,而过度的应激容易使动物感染病毒和细菌,造成急性腹泻,增加患癌的易感性,而且容易发生猝死等与应激相关疾病。因此,寻找有效的抗应激措施(如营养调控),将有利于保护动物的健康,提高动物生产力。类胡萝卜素是一类重要的天然色素,关于它在动物细胞模型中的抗氧化、抗肿瘤、预防动脉粥样硬化和调节胆固醇代谢等生物活性更是成为当今研究的热点之一。柑橘作为果蔬源性的类胡萝卜素资源,无论是其类胡萝卜素的分离纯化,还是其主要类胡萝卜素p-隐黄质的分子营养学的系统探讨均有待深入。本课题综合运用了色谱及波谱等现代仪器手段和化学分析方法,对柑橘中的主要类胡萝卜素之一——p-隐黄质进行了分离纯化,同时采用分子营养学技术和手段,探讨了β-隐黄质的体外抗肿瘤活性及调控THP-1巨噬细胞CYP27A1基因表达的作用与机制。其研究结果如下：1柑橘p-隐黄质的分离纯化采用有机溶剂石油醚：丙酮：甲醇(1：1：1,v/v/v)提取柑橘品种“国庆一号”(Citrus.unshiu Marc.cv.Guoqing No.l)总类胡萝卜素,采用薄层层析和半制备高效液相色谱对总类胡萝卜素进行分离纯化,得到其最主要的组分,系统地运用了色谱和波谱技术,鉴定其为p-隐黄质,得率为3.09±0.13 mg/L(鲜重),纯度为93.5%。2β-隐黄质对胃癌细胞BGC-823细胞株的抑制作用首次提出β-隐黄质抑制胃癌细胞系BGC-823的体外抗肿瘤活性。其抑制机制可能与抑制其增殖,降低其迁移,改变细胞周期,调控周期蛋白表达,作为全反式维甲酸受体(retinoic acid receptor, RAR)的配体诱导RARP (retinoic acid receptor β)的上调表达等方面有关。MTT实验发现0.01到20μM的p-隐黄质对BGC-823细胞的生长有抑制作用,且具有时间-效应和剂量-效应关系。采用刮痕实验观察到p-隐黄质作用3d后的BGC-823细胞与对照组比迁移率显著降低。与对照组比较,流式细胞仪检测到p-隐黄质作用BGC-823细胞后使其细胞周期发生改变,细胞周期停留在G1/G0期。Western blot分析表明经处理2 d后的BGC-823细胞周期蛋白cyclinD1和cyclinE表达下调,p21表达上调,与流式细胞仪的周期变化一致。同时实时PCR表明p-隐黄质能够上调RARβ的mRNA表达且呈量效关系,推测其抑制BGC-823细胞活性与RARβ的上调表达进而诱导下游基因的作用有关。3β-隐黄质调控THP-1巨噬细胞CYP27A1基因表达研究通过芯片分析,β-隐黄质显著提高了THP-1巨噬细胞中与视黄醇类的吸收、转运与代谢相关基因的上调表达,同时激活了CYP27A1基因的信号通路。β-隐黄质能够上调CYP27A1基因的表达,且呈时间-效应和浓度-效应关系。CYP27A1通路相关基因的表达量在RAR活性抑制的条件下显著降低。通过高效液相色谱检测发现胞内β-隐黄质的浓度与处理浓度呈正相关。同时测定了胞内外27-羟基胆固醇的水平,处理组胞内外27-羟基胆固醇的含量明显高于对照组。分子对接模拟实验表明,β-隐黄质在胞内的转运蛋白为CRABP2。这些研究结果都与芯片分析结果相符。研究结果表明,β-隐黄质可被THP-1巨噬细胞吸收,并通过激活RAR受体活性,激发CYP27A1基因信号通路的表达,表现出抗动脉粥样硬化活性。